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呀薯条

金虫 (小有名气)

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虫号: 2830326
注册: 2013-11-27
性别: MM
专业: 生物化学

[求助] 双酶切反应已有5人参与

我需要用到两种酶，分别是BamHI 和 XhoI ，查了通用缓冲液表，可以用到的缓冲液是10 x K..这个缓冲液K不能买到吗？还是只能自己来配置啊？求解
如何判断最后是否酶切成功，我的目的片段要用来做下一步的表达。
分子实验初学者，希望可以得到稍微详细的解释，，非常感谢！

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1楼 2014-05-19 11:02:10

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

范儿

铜虫 (小有名气)

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专业: 系统生物学

引用回帖:

2楼: Originally posted by junboliang at 2014-05-19 11:17:13
从10XK buffer判断你用的应该是Takara的酶。BamHI的说明书上建议用30度酶切，而XhoI是37度酶切，这两个酶在一起做双酶切，效率不太高。可尝试分步酶切或者使用Fermantas的Fastdigest酶，很好用，也很便宜。

贵的要死，还说不贵，比Takara和NEB都贵