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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切反应
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呀薯条

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切反应 已有5人参与

我需要用到两种酶，分别是BamHI 和 XhoI ，查了通用缓冲液表，可以用到的缓冲液是10 x K..这个缓冲液K不能买到吗？还是只能自己来配置啊？求解
          如何判断最后是否酶切成功，我的目的片段要用来做下一步的表达。
分子实验初学者，希望可以得到稍微详细的解释，，非常感谢！
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1楼 2014-05-19 11:02:10
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呀薯条

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by junboliang at 2014-05-19 11:17:13
从10XK buffer判断你用的应该是Takara的酶。BamHI的说明书上建议用30度酶切，而XhoI是37度酶切，这两个酶在一起做双酶切，效率不太高。可尝试分步酶切或者使用Fermantas的Fastdigest酶，很好用，也很便宜。

谢谢啊！那要是分别酶切的话，主要根据哪个因素来判断酶切的顺序啊？是无机盐的浓度还是酶解时的温度呢
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3楼2014-05-19 12:10:14
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junboliang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-05-19 12:10:38
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-19 12:42:02
从10XK buffer判断你用的应该是Takara的酶。BamHI的说明书上建议用30度酶切，而XhoI是37度酶切，这两个酶在一起做双酶切，效率不太高。可尝试分步酶切或者使用Fermantas的Fastdigest酶，很好用，也很便宜。
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2楼2014-05-19 11:17:13
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junboliang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 呀薯条 at 2014-05-19 12:10:14
谢谢啊！那要是分别酶切的话，主要根据哪个因素来判断酶切的顺序啊？是无机盐的浓度还是酶解时的温度呢...

不管先用哪个酶切都可以，只是需要两次胶回收，比较麻烦。
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4楼2014-05-19 12:25:11
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残剑流霜

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-05-19 15:07:27
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-19 15:43:31
TAKARA的K buffer买酶的时候就是自带的，BamH I和Xho I我试过双酶切，TAKARA的BamH I说明上有写37℃时活性也很高，但是不太稳定，我用37℃过夜酶切的，基本没问题的，效率还行。
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5楼2014-05-19 15:03:38
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