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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 表达载体的转化实验
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呀薯条

金虫 (小有名气)

[求助] 表达载体的转化实验 已有5人参与

T载体的转化，我使用的是DH5a 感受态。准备做表达，看了一些文献，好像表达载体都用的BL21,两种感受态有什么区别？表达过程不能用DH5a 吗
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1楼 2014-05-16 10:04:19
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蜂鸟404

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 呀薯条 at 2014-05-18 17:53:45
我不是在用T载体做表达，T载体只是用来克隆。我只是开始有些疑惑，为什么表达和克隆的时候，感受态细胞不能用一个，现在有些懂了。谢谢啊...

简单的说克隆载体的宿主菌去掉了核酸酶，所以核酸可以转进去，而表达载体的宿主菌去掉了蛋白酶所以可以表达蛋白，比如你用BL21提取质粒（核酸）量很少，而且不稳定，所以不能用一个，各有各的作用
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11楼2014-05-20 16:51:40
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条: 金币+1, ★有帮助 2014-05-16 11:02:01
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-05-16 11:26:54
你确定T载体可以做表达？

DH5a和BL21都是大肠杆菌，不是载体。

如果做表达，把目的基因连到表达载体（如pET系列)上，可以转进BL21进行表达。
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做一个阳光、开朗的小和尚
2楼2014-05-16 10:39:11
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shyh1983

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-05-16 13:18:34
gyesang: 回帖置顶 2014-05-16 13:18:36
呀薯条: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢啊 2014-05-18 17:54:52
首先你需明白几个不同的概念，1. T载体是克隆载体，你的基因通过TA克隆法插入载体，这一步的目的是扩增基因，得到大量你要的目的基因片段，以便进行下一步表达载体的构建；DH5α是克隆菌株，不能用来做表达；2. 欲在大肠杆菌中表达外源基因，需要首先构建原核表达载体，如可将构建至T载体的目的通过双酶切切下来然后连接到表达载体上，如PET系列的载体等，构建成原核表达载体后，可将此载体转化表达菌株，如BL21(DE3,)等，如果你的目的基因含有稀有密码子，也可以转化Rosetta系列的表达菌株。最后将构建成功的基因工程菌进行诱导表达。
祝好！
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3楼2014-05-16 13:01:57
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条: 金币+1, ★有帮助 2014-05-18 17:55:17
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-18 19:53:05
DH5a是做克隆的克隆载体，一般不用来表达蛋白。
BL21是表达载体，用来表达载体，用它提质粒就提不出出来，量非常少。
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5楼2014-05-17 17:18:05
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