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筛选到的稳转细胞系的存在状态？游离或是插入到基因组中？已有1人参与
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真核表带载体有真核复制起始位点吗？ 筛选的稳转细胞系中，质粒是都是插入到基因组里面吗？ 如果没有那插入基因组中，那以一种什么形式存在呢？ |
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biostar2009
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3楼2014-05-14 12:35:36
【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-05-31 16:35:22
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一般来讲，构建稳定细胞系外源基因都是要整合都细胞基因组里面去的。整合是随机的。 真核表达载体一般不可以在细胞中复制，具体情况你要看你的质粒和细胞的相关文档。 许多真核表达载体（如pcDNA3.1系列）中含有SV40病毒的复制起始位点，可以在表达SV40病毒T抗原的细胞系(如293T）中复制，从而提高外源基因的表达水平。我的理解是，质粒可以复制，但是不一定都能复制，也不一定和细胞核基因组同步复制。 构建稳定细胞系，可以用质粒，整合率低一点，大概一个月可以得到稳定细胞系，转染前请将质粒线性化。 我用过pEBMulti-Neo， "pEBMulti vector is a gene expression vector for primates (human and monkey) and dog cell lines. pEBMulti vector is harboring OriP(replication origin) and EBNA-1 derived from Epstein-Barr Virus (EBV), therefore pEBMulti vector will be distributed to daughter cells by episomally-replicating system in vivo." 它质粒上有一个元件，可以保证质粒和基因组和细胞基因组同步复制，宣称半个月就可以做出稳定细胞系，但是我用它没有做出来，后来选择了普通质粒。 推荐你用慢病毒，转染效率高，整合率高，文献中用慢病毒构建稳定细胞系比用质粒多。 |
2楼2014-05-14 10:12:21