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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 筛选到的稳转细胞系的存在状态？游离或是插入到基因组中？
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西花厅

铁虫 (初入文坛)

[求助] 筛选到的稳转细胞系的存在状态？游离或是插入到基因组中？ 已有1人参与

真核表带载体有真核复制起始位点吗？
筛选的稳转细胞系中，质粒是都是插入到基因组里面吗？
如果没有那插入基因组中，那以一种什么形式存在呢？
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1楼 2014-05-13 22:12:17
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BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西花厅: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2014-05-14 13:07:14
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-05-31 16:35:22
一般来讲，构建稳定细胞系外源基因都是要整合都细胞基因组里面去的。整合是随机的。
真核表达载体一般不可以在细胞中复制，具体情况你要看你的质粒和细胞的相关文档。
许多真核表达载体（如pcDNA3.1系列）中含有SV40病毒的复制起始位点，可以在表达SV40病毒T抗原的细胞系(如293T）中复制，从而提高外源基因的表达水平。我的理解是，质粒可以复制，但是不一定都能复制，也不一定和细胞核基因组同步复制。
构建稳定细胞系，可以用质粒，整合率低一点，大概一个月可以得到稳定细胞系，转染前请将质粒线性化。
我用过pEBMulti-Neo，
"pEBMulti vector is a gene expression vector for primates (human and monkey) and dog cell lines.
pEBMulti vector is harboring OriP(replication origin) and EBNA-1 derived from Epstein-Barr Virus (EBV), therefore pEBMulti vector will be distributed to daughter cells by episomally-replicating system in vivo."
它质粒上有一个元件，可以保证质粒和基因组和细胞基因组同步复制，宣称半个月就可以做出稳定细胞系，但是我用它没有做出来，后来选择了普通质粒。
推荐你用慢病毒，转染效率高，整合率高，文献中用慢病毒构建稳定细胞系比用质粒多。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2014-05-14 10:12:21
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by BioChen at 2014-05-14 10:12:21
一般来讲，构建稳定细胞系外源基因都是要整合都细胞基因组里面去的。整合是随机的。
真核表达载体一般不可以在细胞中复制，具体情况你要看你的质粒和细胞的相关文档。
许多真核表达载体（如pcDNA3.1系列）中含有S ...


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3楼2014-05-14 12:35:36
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