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11楼2014-05-12 21:22:38

zhaodahe

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louis_cheung: 金币+3 2014-05-13 20:42:48
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-14 22:12:55

不知道你再次连接的自连是4600还是6000？如果前者，可能酶切出现星号活性导致；后者的话可能是你回收4600片段不纯。如果没有更好的办法，可以将两个酶切分步酶切回收，也许效果会好。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

12楼2014-05-12 21:33:21

匿名

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13楼2014-05-12 21:47:05

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匿名

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14楼2014-05-12 21:47:19

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luwei13566

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引用回帖:

13楼: Originally posted by louis_cheung at 2014-05-12 21:47:05
谢谢提醒，这个真的不知道，过两天我去检测看看~...

如果是6000的，那就说明你酶切后回收混入了原有的空载质粒，只要混入质粒自然假阳性就高了。如果是4600的，那就说明你双酶切后的质粒自连了，或者切割位置不对。

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15楼2014-05-12 22:23:38

shiqili471

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louis_cheung: 金币+2, ★有帮助 2014-05-13 20:43:11

双酶切效率不高的话，应该胶回收了吧，双酶切不应该自连啊

16楼2014-05-12 22:55:51

906394648

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-14 22:13:11

EcoR 1和Xba 1在原理上做酶切反应是用不同的buffer，但THERMO公司的快切酶的buffer是通用的，其他公司的不是通用的，你可以看看你的。
我之前也有过这种现象，我和我实验室的同学一起用的这两个酶，他可以切开我切不开，虽然我不知道实质的原因是什么，但是我觉的是跟你本身的基因和引物有关，我后来换了酶切位点，重新设置了引物就没有这个问题了。

17楼2014-05-13 19:24:29