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bpx1990

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于冰冻切片的一些问题,求教 已有1人参与

非生物专业新手第一次做冰片,做完之后一肚子疑问,自己查资料查得有点乱,于是来问问大神们。。。
做的是猪肝脏的冰冻切片。

1、原材料(各种动物组织)如果不能当场做冰片的话,应该怎么保存?我是用液氮冻了之后扔在-50度冷柜(实验室只有这一台冷柜)里,放了差不多一周才去切的片,请问是否合适;
2、看资料说做完冰片之后应当表面覆盖一层中性树脂来保存,否则会龟裂。请问具体的操作方法?比如用刷子刷一层?还有。。中性树脂这东西有具体的名称或者型号吗。。。
3、如果不覆盖这层树脂,冰片能保存多久不龟裂?我做冰片的地方离显微观察的地方还挺远的。。。就粘在载玻片上没涂树脂,然后走半天拿回来看,是不是已经不准了。。。
4、冰片如果长时间保存的话应该放哪儿?指导我做冰片的哥们说放4度冰箱里冷藏就行,可是看文献大家似乎都是放-20冻着。。
5、肝组织冰片该用啥染色剂?看文献似乎都是用HE染色剂?(不过我没染色就去观察了一下,貌似还挺清楚的,这样放进论文里是不是会被无情嘲讽。。)另外肌肉组织和骨组织分别该用啥染色?顺便求配方。。

想到的就是以上这些,说得有点乱,恳请各位大牛神人不吝赐教,先谢过了。。。
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junnavme2014

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
冰冻切片的包埋块最好用干冰或液氮速冻,速冻以后长期不用建议放在-80度冰箱,切片时将包埋块取出后应放在切片机腔内15分钟左右使包埋块升温到腔体温度,不要急着去切,切好的片子应该快速放置于干冰上或暂时存放在切片机中,长期保存建议放在-80度冰箱并且转运过程应该时刻保持低温以使样品保持水分不干燥,使用时应将片子固定然后脱水处理,做HE染色可以具有很好的层次,在显微镜底下观察立体感很好而且层次清晰,制作永久保存片的话建议用中性树脂包埋就可以了,国药就有中性树脂卖,或者上海生工也有卖的,敷上树脂以后再用盖玻片盖片观察。
3楼2014-05-07 20:15:21
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bpx1990

新虫 (初入文坛)

木有人啊。。自己顶一下
2楼2014-05-07 19:39:41
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bpx1990

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by junnavme2014 at 2014-05-07 20:15:21
冰冻切片的包埋块最好用干冰或液氮速冻,速冻以后长期不用建议放在-80度冰箱,切片时将包埋块取出后应放在切片机腔内15分钟左右使包埋块升温到腔体温度,不要急着去切,切好的片子应该快速放置于干冰上或暂时存放在 ...

谢谢!能不能详细讲一下固定和脱水的事情?比如切完片之后要在多长时间之内固定,对于动物组织应当使用什么类型的固定液,还有流程之类的。。
4楼2014-05-07 21:06:42
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junnavme2014

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

切片和固定式可以分开做的,只要你切片保存好的话放-80度冰箱什么时候拿出来脱水都可以的,动物组织建议你直接用37%甲醛稀释10倍的固定剂就可以了,或者用酒精梯度做固定,建议你参考显微切割样品的固定和染色处理,37%甲醛固定剂SIGMA有卖
5楼2014-05-07 22:52:35
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