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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 切片相关 » 关于冰冻切片的一些问题，求教
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bpx1990

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于冰冻切片的一些问题，求教 已有1人参与

非生物专业新手第一次做冰片，做完之后一肚子疑问，自己查资料查得有点乱，于是来问问大神们。。。
做的是猪肝脏的冰冻切片。

1、原材料（各种动物组织）如果不能当场做冰片的话，应该怎么保存?我是用液氮冻了之后扔在-50度冷柜（实验室只有这一台冷柜）里，放了差不多一周才去切的片，请问是否合适；
2、看资料说做完冰片之后应当表面覆盖一层中性树脂来保存，否则会龟裂。请问具体的操作方法？比如用刷子刷一层？还有。。中性树脂这东西有具体的名称或者型号吗。。。
3、如果不覆盖这层树脂，冰片能保存多久不龟裂？我做冰片的地方离显微观察的地方还挺远的。。。就粘在载玻片上没涂树脂，然后走半天拿回来看，是不是已经不准了。。。
4、冰片如果长时间保存的话应该放哪儿？指导我做冰片的哥们说放4度冰箱里冷藏就行，可是看文献大家似乎都是放-20冻着。。
5、肝组织冰片该用啥染色剂？看文献似乎都是用HE染色剂？（不过我没染色就去观察了一下，貌似还挺清楚的，这样放进论文里是不是会被无情嘲讽。。）另外肌肉组织和骨组织分别该用啥染色？顺便求配方。。

想到的就是以上这些，说得有点乱，恳请各位大牛神人不吝赐教，先谢过了。。。
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1楼 2014-05-06 22:15:23
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

junnavme2014

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
bpx1990: 金币+15, ★★★很有帮助 2014-05-08 11:42:02
你如果只是做切片的观察的话，切片从超低温冰箱或是切片机里拿出来只简单过一下酒精梯度就行了（从70-100%，每次30s），在75%酒精以后以需要做HE染色，按照HE染色的正常流程走就行了，接着再走乙醇梯度，最后100%乙醇先30s，然后再过2次无水乙醇，每次1分钟，接着用二甲苯处理30s脱水1次，再接着二甲苯脱水1分30s，等二甲苯完全散去以后滴加中性树脂上去封片就可以了
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6楼2014-05-07 23:00:22
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普通回帖

bpx1990

新虫 (初入文坛)
木有人啊。。自己顶一下
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2楼2014-05-07 19:39:41
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junnavme2014

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
冰冻切片的包埋块最好用干冰或液氮速冻，速冻以后长期不用建议放在-80度冰箱，切片时将包埋块取出后应放在切片机腔内15分钟左右使包埋块升温到腔体温度，不要急着去切，切好的片子应该快速放置于干冰上或暂时存放在切片机中，长期保存建议放在-80度冰箱并且转运过程应该时刻保持低温以使样品保持水分不干燥，使用时应将片子固定然后脱水处理，做HE染色可以具有很好的层次，在显微镜底下观察立体感很好而且层次清晰，制作永久保存片的话建议用中性树脂包埋就可以了，国药就有中性树脂卖，或者上海生工也有卖的，敷上树脂以后再用盖玻片盖片观察。
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3楼2014-05-07 20:15:21
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bpx1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by junnavme2014 at 2014-05-07 20:15:21
冰冻切片的包埋块最好用干冰或液氮速冻，速冻以后长期不用建议放在-80度冰箱，切片时将包埋块取出后应放在切片机腔内15分钟左右使包埋块升温到腔体温度，不要急着去切，切好的片子应该快速放置于干冰上或暂时存放在 ...

谢谢！能不能详细讲一下固定和脱水的事情？比如切完片之后要在多长时间之内固定，对于动物组织应当使用什么类型的固定液，还有流程之类的。。
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4楼2014-05-07 21:06:42
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junnavme2014

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

切片和固定式可以分开做的，只要你切片保存好的话放-80度冰箱什么时候拿出来脱水都可以的，动物组织建议你直接用37%甲醛稀释10倍的固定剂就可以了，或者用酒精梯度做固定，建议你参考显微切割样品的固定和染色处理，37%甲醛固定剂SIGMA有卖
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5楼2014-05-07 22:52:35
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bpx1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by junnavme2014 at 2014-05-07 23:00:22
你如果只是做切片的观察的话，切片从超低温冰箱或是切片机里拿出来只简单过一下酒精梯度就行了（从70-100%，每次30s），在75%酒精以后以需要做HE染色，按照HE染色的正常流程走就行了，接着再走乙醇梯度，最后100%乙 ...

很详细了，感谢帮忙！
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7楼2014-05-08 11:41:55
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jennifermatt

木虫 (小有名气)
学习了，谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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求是
8楼2014-08-17 09:12:47
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running113

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by junnavme2014 at 2014-05-07 23:00:22
你如果只是做切片的观察的话，切片从超低温冰箱或是切片机里拿出来只简单过一下酒精梯度就行了（从70-100%，每次30s），在75%酒精以后以需要做HE染色，按照HE染色的正常流程走就行了，接着再走乙醇梯度，最后100%乙 ...

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SCI我来了！！！
9楼2014-08-18 23:11:47
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HTweiyi

银虫 (小有名气)
取下的组织可以液氮最好就做包埋,放的话也不要太长时间.封片的东西就叫做中性树胶,可以不用封片,可以放几天没事的,冰箱中放着,组织观察的话,都需要染色的,不染色怎么发文章,那样的话没有对比性.染色的话需要找那种对你的组织对比较好的,呈现出不同的颜色,这样才好!
有问题可以在询问,希望对你有帮助!网址http://www.hwatao.com/HuataiIndex.aspx
专门制定一些元代细胞\细胞株,及对外有技术承包业务!
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10楼2015-06-29 14:16:14
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