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段星亮

铜虫 (初入文坛)

[求助] 拟南芥气孔张开问题 已有2人参与

用MES缓冲液(PH 6.15),30ml加吐温1ml,将拟南芥叶片下表皮撕下,浸在缓冲液中光照2-4h,气孔还是没有张开,为什么?
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starseacow

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另外,如果是选择单个气孔追踪,可以只测量宽度变化。对于多个气孔,最好使用比值。
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8楼2014-05-15 04:01:59
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1 你使用的MES缓冲液具体组分是什么?含有什么其他离子(钙或钾?)
2 为什么加吐温?
3 光照强度是多少?
以上几个问题都可能影响气孔运动,甚至直接杀死保卫细胞。正常情况下,撕取得叶片在MES缓冲液里冲10-20 min,可以看到气孔张开。
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2楼2014-05-06 23:33:48
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段星亮

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-05-06 23:33:48
1 你使用的MES缓冲液具体组分是什么?含有什么其他离子(钙或钾?)
2 为什么加吐温?
3 光照强度是多少?
以上几个问题都可能影响气孔运动,甚至直接杀死保卫细胞。正常情况下,撕取得叶片在MES缓冲液里冲10-20 ...

1. MES buffer (5mM KCl, 10mM MES, 50mM CaCl2, PH 6.15)
2. 吐温能增加buffer密度,使叶片能够沉下去
3. 放到白光下20cm处,光照足够强
还有就是一般多长时间气孔能够张开?光照2h拟南芥野生型都没有张开
3楼2014-05-07 21:18:39
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+10, APEPI+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2014-05-12 08:36:15
引用回帖:
3楼: Originally posted by 段星亮 at 2014-05-07 21:18:39
1. MES buffer (5mM KCl, 10mM MES, 50mM CaCl2, PH 6.15)
2. 吐温能增加buffer密度,使叶片能够沉下去
3. 放到白光下20cm处,光照足够强
还有就是一般多长时间气孔能够张开?光照2h拟南芥野生型都没有张开...

1 buffer组成没问题
2 我们是使用胶水固定叶片(Factor II Inc出的一种B-500 PSA 50/50),我不确定吐温是否影响气孔开闭
3 光照过强可能影响气孔开闭
4 做拟南芥气孔实验还需要考虑自然生物时钟,早上在气孔开放前取叶片,气孔经处理后开放很快,下午或晚上的叶片,气孔开放多少会受到影响。根据我的经验,早上的野生植株,就算气孔已经开放,可以至于暗处一个小时另气孔关闭,再光照处理,气孔可以在半小时内再开放。
5 最后,楼主所说气孔没有开放,是真正对处理没有反应,还是气孔已经打开了,你再处理也看不到变化?最好上张照片。
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4楼2014-05-07 23:01:14
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