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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 模式生物 » 拟南芥气孔张开问题
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段星亮

铜虫 (初入文坛)

[求助] 拟南芥气孔张开问题 已有2人参与

用MES缓冲液（PH 6.15），30ml加吐温1ml，将拟南芥叶片下表皮撕下，浸在缓冲液中光照2-4h，气孔还是没有张开，为什么？
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1楼 2014-05-04 10:50:54
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+10, APEPI+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2014-05-12 08:36:15
引用回帖:
3楼: Originally posted by 段星亮 at 2014-05-07 21:18:39
1. MES buffer （5mM KCl, 10mM MES, 50mM CaCl2, PH 6.15）
2. 吐温能增加buffer密度，使叶片能够沉下去
3. 放到白光下20cm处，光照足够强
还有就是一般多长时间气孔能够张开？光照2h拟南芥野生型都没有张开...

1 buffer组成没问题
2 我们是使用胶水固定叶片（Factor II Inc出的一种B-500 PSA 50/50），我不确定吐温是否影响气孔开闭
3 光照过强可能影响气孔开闭
4 做拟南芥气孔实验还需要考虑自然生物时钟，早上在气孔开放前取叶片，气孔经处理后开放很快，下午或晚上的叶片，气孔开放多少会受到影响。根据我的经验，早上的野生植株，就算气孔已经开放，可以至于暗处一个小时另气孔关闭，再光照处理，气孔可以在半小时内再开放。
5 最后，楼主所说气孔没有开放，是真正对处理没有反应，还是气孔已经打开了，你再处理也看不到变化？最好上张照片。
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4楼2014-05-07 23:01:14
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1 你使用的MES缓冲液具体组分是什么？含有什么其他离子（钙或钾？）
2 为什么加吐温？
3 光照强度是多少？
以上几个问题都可能影响气孔运动，甚至直接杀死保卫细胞。正常情况下，撕取得叶片在MES缓冲液里冲10-20 min，可以看到气孔张开。
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2楼2014-05-06 23:33:48
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段星亮

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-05-06 23:33:48
1 你使用的MES缓冲液具体组分是什么？含有什么其他离子（钙或钾？）
2 为什么加吐温？
3 光照强度是多少？
以上几个问题都可能影响气孔运动，甚至直接杀死保卫细胞。正常情况下，撕取得叶片在MES缓冲液里冲10-20 ...

1. MES buffer （5mM KCl, 10mM MES, 50mM CaCl2, PH 6.15）
2. 吐温能增加buffer密度，使叶片能够沉下去
3. 放到白光下20cm处，光照足够强
还有就是一般多长时间气孔能够张开？光照2h拟南芥野生型都没有张开
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3楼2014-05-07 21:18:39
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段星亮

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2014-05-07 23:01:14
1 buffer组成没问题
2 我们是使用胶水固定叶片（Factor II Inc出的一种B-500 PSA 50/50），我不确定吐温是否影响气孔开闭
3 光照过强可能影响气孔开闭
4 做拟南芥气孔实验还需要考虑自然生物时钟，早上在气孔开 ...

Thank you !
l will try again!
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5楼2014-05-09 20:01:13
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段星亮

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 段星亮 at 2014-05-07 21:18:39
1. MES buffer （5mM KCl, 10mM MES, 50mM CaCl2, PH 6.15）
2. 吐温能增加buffer密度，使叶片能够沉下去
3. 放到白光下20cm处，光照足够强
还有就是一般多长时间气孔能够张开？光照2h拟南芥野生型都没有张开...

追问一下，有篇文章中测气孔张开用width/length，为什么？
Enhanced abscisic acid-mediated responses in nia1nia2noa1-2 triple mutant impaired in NIA/NR- and AtNOA1-dependent nitric oxide biosynthesis in Arabidopsis
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6楼2014-05-14 18:52:55
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 段星亮 at 2014-05-14 18:52:55
追问一下，有篇文章中测气孔张开用width/length，为什么？
Enhanced abscisic acid-mediated responses in nia1nia2noa1-2 triple mutant impaired in NIA/NR- and AtNOA1-dependent nitric oxide biosynthesis i ...

在研究气孔运动时，Stomatal apertures是一个广泛使用的指标，即测量气孔的宽度与最大长度的比值。这个数据可以很好地反应气孔面积的变化，进一步体现气孔的开闭。
见
Kenji Omasa and Morio Onoe
Measurement of Stomatal Aperture by Digital Image Processing
Plant Cell Physiol (1984) 25 (8): 1379-1388.
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7楼2014-05-14 21:52:18
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
另外，如果是选择单个气孔追踪，可以只测量宽度变化。对于多个气孔，最好使用比值。
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8楼2014-05-15 04:01:59
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echoluohe

捐助贵宾 (小有名气)
很受用~~
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心明若镜，不将不迎
9楼2014-06-23 21:25:59
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kang.njudt

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

确实有帮助，但是一般情况下，叶片离体后是否会由于蒸腾作用失水，最终气孔关闭啊？
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10楼2015-08-04 15:20:16
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