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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 关于用Ellman法测巯基，在计算中出现负值是怎么回事
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杨岩yer

金虫 (小有名气)

[求助] 关于用Ellman法测巯基，在计算中出现负值是怎么回事 已有1人参与

　　　参考的方法如下：
取1mL在2.3.3.6中配制的豆浆溶液加入2.0mL的缓冲液1（每升溶液含10.4gTris，6.9g甘氨酸，1.2g EDTA，pH=8.0）或缓冲液2（每升溶液含10.4gTris，6.9g甘氨酸，1.2g EDTA，480g尿素，pH=8.0）后再加入0.02mL的Ellman试剂（0.2gDTNB溶于50ml缓冲溶液1中），25℃下保温5min，采用可见分光光度计，在412nm处测定吸光值。实验以不加豆浆，而加Ellman试剂为空白。巯基含量的测定= 73.53*A412*D/C  , 式中A412为有DTNB存在时豆浆的吸光值减去无DTNB存在时豆浆的吸光值，D为稀释倍数，C为豆浆固形物含量
   这是一篇文献中测定巯基的方法，我也是按这个过程操作的，在计算过程中A412（有DTNB存在时豆浆的吸光值减去无DTNB存在时豆浆的吸光值）出现了负值，不知道有么有人知道可能是什么问题造成的呢，该怎样处理这个问题，而且已经重复做了试验，确定不是操作失误，会出现三四个负值，请问方法有什么可能存在的问题吗？求大神解答啊
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1楼 2014-04-30 14:24:39
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杨岩yer

金虫 (小有名气)
为什么有的实验中，A412直接为加了DTNB的吸光度，有的是加与不加的差值？

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4楼2014-05-03 23:13:19
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雪落

木虫 (著名写手)

想念你们

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
杨岩yer: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-05-12 17:17:36
建议做个波长扫描，看一下有DTNB存在时豆浆的最大吸收波长是不是412nm，和无DTNB存在时豆浆在412nm处的吸光度
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我在佛前求了五百年 只为和你结一段尘世的缘 我化作一棵花树长在你门前 小心地绽放一生的绚烂 你走过没有看我一眼 那落了一地的不是花瓣 是我破碎的心一片
2楼2014-04-30 14:37:50
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杨岩yer

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 雪落 at 2014-04-30 14:37:50
建议做个波长扫描，看一下有DTNB存在时豆浆的最大吸收波长是不是412nm，和无DTNB存在时豆浆在412nm处的吸光度

谢啦，今天下去去测了，确实是412，因为实验需要不同温度热处理，在热处理过程中有几个值出现负数了。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2014-04-30 18:49:34
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杨岩yer

金虫 (小有名气)
有谁了解呢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2014-05-03 23:13:29
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