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yuebanwan金虫 (正式写手)
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[交流]
求助关于根尖染色体制片的一个问题
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最近涉及一个试验，要做根尖染色体制片，其中使用的 酶解缓冲液中浸泡10min 具体是什么酶，有经验的请指点。 [search]酶解缓冲液[/search] |
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donna181
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2楼2008-03-07 14:21:09
donna181
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asr(金币+2,VIP+0):thanks,辛苦了
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根尖制片的简单过程如下: 1.取材 2.预处理 将根尖投入0.002mol/L 8-羟基喹啉水溶液处理3—4小时。目的是抑制纺锤丝的形成，收集更多中期分裂相，同时使染色体缩短，在细胞质内更加分散。温度10 ℃ —15℃左右为宜。 3.、固定 将处理过的根尖用水冲洗两次，然后移入卡诺氏固定液中（固定液的量约为材料的10倍）。固定2—24小时后用95%酒精冲洗，再转入70%酒精中，于 4 ℃保存，保存时间最好不超过2个月。 4.解离 取3—5个，置于小指管中，加入1 mol/L HCl或浓盐酸： 95%酒精=1：1的解离液，加入的量大约是材料的3—4倍，室温下解离10—15分钟。解离完毕，用自来水换洗3次，每次5分钟。将解离液彻底洗净。 解离的目的：将细胞分散开来，使组织软化，易于压片，同时还能清除细胞质中的一些成分，使制片中的染色体背景清晰。 5.、染色及压片 看看适不适合你的实验,希望你的实验成功 |
3楼2008-03-07 14:27:27
4楼2008-03-07 14:40:29
yuebanwan
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多谢2楼和3楼的答复。我把我的试验简单介绍以下，希望你们能提出宝贵意见： 在育种的过程中，我看到一些很可能是孤雌生殖的小苗，前几天收集了父母本一起桶载，准备进行染色体鉴定，确认是不是孤雌生殖，试验要求也就是看清楚染色体数目，作父母本，主要是木本和后代的染色体数目比较。 最近在查阅一些相关的资料，我不知是不是没有人做过，还是很早就有人做而没有资料。最后中文的资料没有查到一篇。前几天得到木虫的帮忙，查了一篇国外的，是1963年的，但是那文章上面也没有染色体图片对比。我现在在考虑还有没有必须要继续开展这个试验。犹豫中~~请指点指点。另外，2楼说的比较详细，但是染色那一步用什么染？用卡宝品红可以吗？ |
5楼2008-03-07 15:10:48
donna181
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6楼2008-03-07 17:02:32