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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 药理实验一些不懂的问题想请教一下
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xxlixin

新虫 (小有名气)

[求助] 药理实验一些不懂的问题想请教一下已有3人参与

我要做的是一个药物对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用，现在还没开始做。
      文献上说的是大鼠眼球采血，分离血清，检测GPT活性，TG含量，然后处死小鼠，立即称取0.2g新鲜肝脏放入置有冰冷的匀浆介质的玻璃匀浆器中，在冰浴中制成100g/L匀浆，然后离心，取上清液，再测定GSH、MDA的含量。
     我现在不清楚的问题是大鼠一般要用什么管装，然后取血量是多少，然后需要怎么处理，需不需要加抗凝剂什么的，最后是拿到医院去测它的参数。还有就是要观察肝组织的SDH活性和糖原含量变化，不清楚是如何观察？
      希望有朋友能尽快帮忙解答一下，O(∩_∩)O谢谢
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1楼2014-04-22 10:38:41
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waim5852

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
毛细管眼球取血，至于事先用抗凝剂浸润过的Ep管中即可，取血量按照自己所要测试物质取样量而定，肯定远大于该值。一般大鼠眼球取血量较大，1ml没问题，应该够你用至于观察肝组织的SDH活性和糖原含量变化方法是需要查阅文献总结的，选择方法才可以，不好说用哪种。
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2楼2014-04-22 10:52:50
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xxlixin

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by waim5852 at 2014-04-22 10:52:50
毛细管眼球取血，至于事先用抗凝剂浸润过的Ep管中即可，取血量按照自己所要测试物质取样量而定，肯定远大于该值。一般大鼠眼球取血量较大，1ml没问题，应该够你用至于观察肝组织的SDH活性和糖原含量变化方法是需要查 ...

抗凝剂一般用什么啊？

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3楼2014-04-22 12:18:44
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waim5852

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们一般用肝素。下面是网上查的抗凝剂，你参考一下：

抗凝是用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固。能够阻止血液凝固的物质，称为抗凝剂或抗凝物质。常用抗凝剂和使用方法如下。

　　1.乙二胺四乙酸（EDTA）盐常用有钠盐或钾盐，能与血液中钙离子结合成螯合物，使Ca2+失去凝血作用，阻止血液凝固。根据国际血液学标准化委员会（ICSH）建议，CBC抗凝剂用量为EDTA-K.2H2O1.5～2.2mg/ml血液。不适于凝血检查、血小板功能试验。

　　2.草酸盐常用有草酸钠、草酸钾、草酸铵，溶解后解离的草酸根离子能与样本中钙离子形成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血作用，阻止血液凝固。2mg草酸盐可抗凝lml血液。但不适于凝血检查。而且，草酸盐浓度过高还会导致溶血、改变血液pH，干扰血浆钾、钠、氯和某些酶活性的测定。

　　双草酸盐抗凝剂：适用于血细胞比容、CBC、网织红细胞计数等检查，不适于血小板计数、白细胞分类计数。

　　3.肝素是加强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶作用，阻止医学教.育网搜集整理凝血酶的形成，并阻止血小板聚集等作用，从而阻止血液凝固。肝素是红细胞透渗脆性试验的理想抗凝剂。但不适于CBC、细胞形态学检查。每毫升血液肝素用量为（15±2.5）U，多为肝素钠盐或钾盐。

　　4.枸橼酸盐常用有枸橼酸钠，能与血液中钙离子结合形成螯合物，阻止血液凝固。枸橼酸盐抗凝剂的抗凝力不如上述抗凝剂。枸橼酸钠与血液的抗凝比例为l：9或1：4.适用于红细胞沉降率、凝血检查，是输血保养液的成分。
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4楼2014-04-22 12:48:04
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xxlixin

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by waim5852 at 2014-04-22 12:48:04
我们一般用肝素。下面是网上查的抗凝剂，你参考一下：

抗凝是用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固。能够阻止血液凝固的物质，称为抗凝剂或抗凝物质。常用抗凝剂和使用方法如下 ...

嗯，应该也是肝素，那么取血后怎样分离血清呢？需要怎样保存，有效期是多久？

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5楼2014-04-22 13:40:55
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waim5852

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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5楼: Originally posted by xxlixin at 2014-04-22 13:40:55
嗯，应该也是肝素，那么取血后怎样分离血清呢？需要怎样保存，有效期是多久？
...

离心就可以，但是不能高速，转速最好查一下文献，因为所观察物质不同，要求不同，高速容易红细胞破裂。离心后，分离血清，放在冰上就可以送样，平时4度冰箱就可以，时间不能太长，有的物质长时间会降解。
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6楼2014-04-22 16:18:02
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kyhappy

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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5楼: Originally posted by xxlixin at 2014-04-22 13:40:55
嗯，应该也是肝素，那么取血后怎样分离血清呢？需要怎样保存，有效期是多久？
...

肝素抗凝收集到的是血浆不是血清，若需要血清不需要添加任何抗凝剂！！商业化的血清管（一般红盖）是一种干燥的空管没有任何添加剂，血液自然凝固需在37摄氏度下，并且放置60分钟以上，此管主要用于医学检验生化学，免疫学等检查。
血清离心条件一般是：室温放置30-60分钟，然后离心，离心条件：1800g， 15min，4摄氏度
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7楼2014-04-22 16:30:23
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hw26904636

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
取血清是不用加抗凝剂的、血清我们这边4000转10分钟就可以了还有眼球取血一般都是直接摘掉小鼠眼球的也接不了太多血的、量当然是越多越好了根本就没有多少。其他你说的不懂了
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8楼2014-04-22 20:23:57
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xxlixin

新虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by hw26904636 at 2014-04-22 20:23:57
取血清是不用加抗凝剂的、血清我们这边4000转10分钟就可以了还有眼球取血一般都是直接摘掉小鼠眼球的也接不了太多血的、量当然是越多越好了根本就没有多少。其他你说的不懂了

嗯，那么大鼠眼球取血后用离心管拿去离心，然后分离血清用血清管装好保存拿去测参数吗？

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9楼2014-04-23 12:08:19
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xxlixin

新虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by kyhappy at 2014-04-22 16:30:23
肝素抗凝收集到的是血浆不是血清，若需要血清不需要添加任何抗凝剂！！商业化的血清管（一般红盖）是一种干燥的空管没有任何添加剂，血液自然凝固需在37摄氏度下，并且放置60分钟以上，此管主要用于医学检验生化学 ...

血清管一般实验室有吗？1ml血可以分离多少血清啊？

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10楼2014-04-23 12:10:13
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