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xxlixin

新虫 (小有名气)

[求助] 药理实验一些不懂的问题想请教一下 已有3人参与

我要做的是一个药物对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用,现在还没开始做。
      文献上说的是大鼠眼球采血,分离血清,检测GPT活性,TG含量,然后处死小鼠,立即称取0.2g新鲜肝脏放入置有冰冷的匀浆介质的玻璃匀浆器中,在冰浴中制成100g/L匀浆,然后离心,取上清液,再测定GSH、MDA的含量。
     我现在不清楚的问题是大鼠一般要用什么管装,然后取血量是多少,然后需要怎么处理,需不需要加抗凝剂什么的,最后是拿到医院去测它的参数。还有就是要观察肝组织的SDH活性和糖原含量变化,不清楚是如何观察?
      希望有朋友能尽快帮忙解答一下,O(∩_∩)O谢谢
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xxlixin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by waim5852 at 2014-04-22 10:52:50
毛细管眼球取血,至于事先用抗凝剂浸润过的Ep管中即可,取血量按照自己所要测试物质取样量而定,肯定远大于该值。一般大鼠眼球取血量较大,1ml没问题,应该够你用至于观察肝组织的SDH活性和糖原含量变化方法是需要查 ...

抗凝剂一般用什么啊?

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-04-22 12:18:44
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waim5852

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
毛细管眼球取血,至于事先用抗凝剂浸润过的Ep管中即可,取血量按照自己所要测试物质取样量而定,肯定远大于该值。一般大鼠眼球取血量较大,1ml没问题,应该够你用至于观察肝组织的SDH活性和糖原含量变化方法是需要查阅文献总结的,选择方法才可以,不好说用哪种。
2楼2014-04-22 10:52:50
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waim5852

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们一般用肝素。下面是网上查的抗凝剂,你参考一下:

抗凝是用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性,以阻止血液凝固。能够阻止血液凝固的物质,称为抗凝剂或抗凝物质。常用抗凝剂和使用方法如下。

  1.乙二胺四乙酸(EDTA)盐常用有钠盐或钾盐,能与血液中钙离子结合成螯合物,使Ca2+失去凝血作用,阻止血液凝固。根据国际血液学标准化委员会(ICSH)建议,CBC抗凝剂用量为EDTA-K.2H2O1.5~2.2mg/ml血液。不适于凝血检查、血小板功能试验。

  2.草酸盐常用有草酸钠、草酸钾、草酸铵,溶解后解离的草酸根离子能与样本中钙离子形成草酸钙沉淀,使Ca2+失去凝血作用,阻止血液凝固。2mg草酸盐可抗凝lml血液。但不适于凝血检查。而且,草酸盐浓度过高还会导致溶血、改变血液pH,干扰血浆钾、钠、氯和某些酶活性的测定。

  双草酸盐抗凝剂:适用于血细胞比容、CBC、网织红细胞计数等检查,不适于血小板计数、白细胞分类计数。

  3.肝素是加强抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)灭活丝氨酸蛋白酶作用,阻止医学教.育网搜集整理凝血酶的形成,并阻止血小板聚集等作用,从而阻止血液凝固。肝素是红细胞透渗脆性试验的理想抗凝剂。但不适于CBC、细胞形态学检查。每毫升血液肝素用量为(15±2.5)U,多为肝素钠盐或钾盐。

  4.枸橼酸盐常用有枸橼酸钠,能与血液中钙离子结合形成螯合物,阻止血液凝固。枸橼酸盐抗凝剂的抗凝力不如上述抗凝剂。枸橼酸钠与血液的抗凝比例为l:9或1:4.适用于红细胞沉降率、凝血检查,是输血保养液的成分。
4楼2014-04-22 12:48:04
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xxlixin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by waim5852 at 2014-04-22 12:48:04
我们一般用肝素。下面是网上查的抗凝剂,你参考一下:

抗凝是用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性,以阻止血液凝固。能够阻止血液凝固的物质,称为抗凝剂或抗凝物质。常用抗凝剂和使用方法如下 ...

嗯,应该也是肝素,那么取血后怎样分离血清呢?需要怎样保存,有效期是多久?

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-04-22 13:40:55
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