24小时热门版块排行榜    

查看: 3463  |  回复: 37
当前主题已经存档。

biogefart

木虫 (著名写手)

用的啥胶回收试剂盒?

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 关注,.
我曾经和你一样,最后发现是胶回收试剂盒回收率太低,回收完跑个电泳看看,至少肉眼要看得见。
闹太套
31楼2008-03-16 05:48:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yellow.

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 关注,.
直接pcr产物酶切,因为保护碱基毕竟保护水平有限,酶切不完全的,尤其是Nde1(建议开始酶切时加一半酶,半小时后再补加),回收到的不一定都是酶切开的,所以建议用T载体。
载体酶切时可加点去磷酸酶(个人觉得没强烈必要,但鉴于你后来说假阳性较多,才建议的)
32楼2008-03-16 10:13:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

请问楼上的,如果是双酶切,用不同的酶来切造成粘性末端的话也可以用碱性磷酸酶处理吗?只处理质粒吗、片段需要去磷酸化吗?
33楼2008-03-17 23:51:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

请问有人用过NarI这个酶吗
34楼2008-03-23 13:33:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greenspringmi

银虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
先连接T载体吧,再酶切回收时:目的片断的量大;将表达载体一起切,只要T载体上的片断切下来了,表达载体的酶切位点也应该切开了。
这样,就不用再检测酶的活力之类的事情了。

要保证感受态的质量,最省事、有效的办法是买商业感受态。TIANGEN的感受态在16RMB左右,一枝可以用两次,效果不错。我们实验室连接表达载体时都是用商业感受态,效率高,节省时间。
35楼2008-03-23 14:14:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

istillholdon

铜虫 (正式写手)

在feesee.com上找Dolly·s  legacy 里面可能有你要的答案。。。
Ikeepholdingontotheinnocencethatyouhave.
36楼2008-03-25 01:27:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuchang

金虫 (初入文坛)


reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
做实验一定要设好对照。
载体双切完后,跑胶回收是必要的,回收后自联转化看看,如果自联转化的出来,说明双切的效果不好,那最好就顺序单酶切。只要载体双切制备好了,应该不太可能出现楼主这样的问题。
此外,适当的延长酶切时间也能改善酶切效果,切十个小时都无妨。
PCR产物切完没必要跑胶回收,酚氯仿抽提后乙醇沉淀既可。

[ Last edited by shuchang on 2008-3-25 at 01:43 ]
37楼2008-03-25 01:37:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silentguy

铜虫 (小有名气)

你的摇菌时间是多长?

★ ★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 关注,.
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心
我们这边有两个同学都是一开始没做出来,后来延长摇菌时间,一个摇了1夜,还有一个摇了两个晚上,后来电泳都出来了。
38楼2008-03-25 10:43:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 guoqin_shiyin 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见