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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » pEGFP-C1载体上连接目的基因，瞬时转染后48小时可以用WB直接检测几个蛋白表达量吗
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xyjk11

木虫 (初入文坛)

[求助] pEGFP-C1载体上连接目的基因，瞬时转染后48小时可以用WB直接检测几个蛋白表达量吗 已有2人参与

我在pEGFP-C1载体上连接目的基因，瞬时转染后48小时后。荧光显微镜下观察到空载体和构建的载体均有大量荧光，可以直接进行RT-PCR和WB检测其中几个蛋白的表达量吗，想通过WB观察转染进去高表达目的蛋白对其他几个蛋白的影响。有人说要进行筛选，得到稳定的细胞株才能检测，但是有人说可以直接转染48小时检测，这难道就是瞬时转染和稳定转染的区别吗，但是我只想通过瞬时转染来说明问题，稳定筛选时间太长，如果荧光显微镜下证实转染效率大于60%。就可以通过瞬时转染证明吗，期待大家帮忙解决这个疑惑，谢谢！！
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早点起程，一路从容
1楼 2014-04-17 16:28:10
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xyjk11

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by for5 at 2014-04-17 16:32:15
不需要做稳转。只是做信号通路。提取你要的rna和蛋白检测就好。做好对照

我就是做信号通路，构建一个蛋白高表达，观察对其他两个蛋白的影响。如果做realtime PCR 和WB是不是对转染效率有很高的要求吧，我是做了空白对照组和空载体组对照的
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早点起程，一路从容
3楼2014-04-17 16:34:27
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xyjk11: 金币+5, ★有帮助 2014-04-22 08:59:07
youlinglyw: 金币+1, 感谢经验分享 2014-04-23 22:47:43
不需要做稳转。只是做信号通路。提取你要的rna和蛋白检测就好。做好对照

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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操蛋的XX
2楼2014-04-17 16:32:15
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weskerZXC

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xyjk11: 金币+5 2014-04-24 08:41:00
瞬转就可以检测，只不过稳转后续实验会比较轻松
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4楼2014-04-23 18:49:01
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