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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 小球藻转化
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风吹我已散

木虫 (正式写手)

[求助] 小球藻转化 已有1人参与

最近刚学做小球藻转化，但是筛选平板上老是没有长出藻了，而且菌长出了很多。
我用的是电击转化，请大家帮我看看是什么原因，操作步骤如下：
1. 将培养好的藻离心，收集藻体
2.用PBS缓冲液洗一遍，离心
3.用STM洗一遍，离心
4.用STM加转化质粒至1mL，备用
5.将浸泡在无水乙醇中的转化杯取出（先在硝酸银里浸泡1小时，后在75%的酒精里浸泡），晾干，加200ul的混合液，电击转化。
是不是哪个步骤我没注意，还是什么原因？各位在转化时有什么经验么？
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1楼 2014-04-17 11:34:08
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wit0329

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
风吹我已散(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流, 2014-04-18 08:57:04
赶紧换课题吧！这个太不现实了，和我们实验室有合作的实验室，天天打基因枪。前几代可以获得，随后就会丢失。
这个题是好的，但是现在正常的方式都不行。除非你找到，小球藻不会丢失的方法。现在NERL只是筛选藻种，相比较转化改造来的快得多。
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2楼2014-04-17 20:37:47
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风吹我已散

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wit0329 at 2014-04-17 20:37:47
赶紧换课题吧！这个太不现实了，和我们实验室有合作的实验室，天天打基因枪。前几代可以获得，随后就会丢失。
这个题是好的，但是现在正常的方式都不行。除非你找到，小球藻不会丢失的方法。现在NERL只是筛选藻种， ...

多谢你地提醒，但是我觉得有丢失是正常的；有很多成功的例子啊，我的问题不是在于丢失，而是没有转化的结果，而且长菌了。
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3楼2014-04-18 08:42:23
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