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风吹我已散

木虫 (正式写手)

[求助] 小球藻转化 已有1人参与

最近刚学做小球藻转化,但是筛选平板上老是没有长出藻了,而且菌长出了很多。
我用的是电击转化,请大家帮我看看是什么原因,操作步骤如下:
1. 将培养好的藻离心,收集藻体
2.用PBS缓冲液洗一遍,离心
3.用STM洗一遍,离心
4.用STM加转化质粒至1mL,备用
5.将浸泡在无水乙醇中的转化杯取出(先在硝酸银里浸泡1小时,后在75%的酒精里浸泡),晾干,加200ul的混合液,电击转化。
是不是哪个步骤我没注意,还是什么原因?各位在转化时有什么经验么?
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wit0329

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
风吹我已散(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流, 2014-04-18 08:57:04
赶紧换课题吧!这个太不现实了,和我们实验室有合作的实验室,天天打基因枪。前几代可以获得,随后就会丢失。
这个题是好的,但是现在正常的方式都不行。除非你找到,小球藻不会丢失的方法。现在NERL只是筛选藻种,相比较转化改造来的快得多。
2楼2014-04-17 20:37:47
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风吹我已散

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wit0329 at 2014-04-17 20:37:47
赶紧换课题吧!这个太不现实了,和我们实验室有合作的实验室,天天打基因枪。前几代可以获得,随后就会丢失。
这个题是好的,但是现在正常的方式都不行。除非你找到,小球藻不会丢失的方法。现在NERL只是筛选藻种, ...

多谢你地提醒,但是我觉得有丢失是正常的;有很多成功的例子啊,我的问题不是在于丢失,而是没有转化的结果,而且长菌了。
3楼2014-04-18 08:42:23
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