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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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model031

银虫 (正式写手)

[交流] 从质粒扩片段为什么扩不出来?

我设计了一对引物,在两端加了两个酶切位点,与摸板配对的序列有18个,加上酶切位点和保护碱基一共27个.配对那部分序列的Tm值很低正 反向分别有43 和39左右,请问我退火温度设到多少合适啊!
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model031

银虫 (正式写手)

我3.17号扩出来了我的目的片段,但最近用相同的程序和试剂却一直没扩出来,不知道什么原因,盼高手再指点下,昨天老板又开会了,他说我的很简单,就一PCR,言外之意,我的进展太慢了,可我一直不停的在做啊.所以搞的很郁闷,都不想去实验室了,一进去头就晕.
13楼2008-03-28 10:27:09
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

退火温度低点了,40℃试试吧
细推物理须行乐。
2楼2008-03-04 20:20:59
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model031

银虫 (正式写手)

这样会不会有很多非特意性的条带啊,我准备设个浓度剃度从42到53不知道行不行 我们实验室有个PCR仪可以设剃度
3楼2008-03-04 20:38:38
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totoro一家亲

铜虫 (小有名气)

举例说明,上游引物Tm是45度、下游50度。那么退火应该是45-5=40度。
但是40度确实很低,你可以考虑设置touch down PCR
不要太过于在意非特异性的带,你要首先P得出来再优化
如果实在不行,把你要得带做个胶回收也行呀
4楼2008-03-05 16:52:16
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