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新乡小树捐助贵宾 (正式写手)
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LiCl毕赤酵母感受态制备需要向大肠杆菌那样冰浴吗 已有1人参与
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| LiCl毕赤酵母感受态制备需要向大肠杆菌那样冰浴吗？第一次没冰长出来很少，不知道是不是这个问题。 |
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liyu0355
木虫 (正式写手)
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- 虫号: 13467
- 注册: 2003-05-31
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
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制备KM71感受态细胞 a. 从活化的YPD平板上挑取一个单菌落接种于5mLYPD液体培养基，28℃摇床250 rpm过夜培养。 b. 接种1mL过夜培养液于100mL新鲜YPD液体培养基，28℃摇床250 rpm扩大培养至OD600 =1.3-1.5。 c. 4, ℃4000rpm离心5min收集菌体细胞，用100mL冰冷无菌水重悬菌体细胞。 d. 重复上步操作一遍。 e. 4, ℃4000×g离心5min收集菌体细胞，用50mL冰冷1mol⋅L-1山梨醇溶液重悬菌体细胞。 f. 4, ℃4000rpm离心5min收集菌体细胞，用1mL冰冷11mol⋅L-1山梨醇溶液重悬菌体细胞。置于冰上备用(也可将此感受态细胞分装200μL于离心管中冻存备用，但其转化效率将明显下降)。 |
5楼2014-05-05 09:24:04