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liulugang

木虫 (小有名气)

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[求助] 有关重叠PCR的问题求指导，谢谢。。已有2人参与

我想将一段400bp DNA片段与一段3500bp DNA连接，请问重叠pcr适合吗？有什么要注意的？文献上说做重叠pcr的两条片段需大小接近，我这种情况是不是不适合使用重叠pcr？
还望虫友指导下，谢谢啦！！！

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1楼 2014-04-09 09:17:55

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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)

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引用回帖:

15楼: Originally posted by jinzhi2010 at 2014-08-07 23:23:42
目的条带很淡的话，用小体系多p几管回收增加浓度，我就是这么做的，原来也是都重组不上，后来就成功了。
...

嗯，我是这么做的，酶切鉴定也对的，只不过现在测序，是失败的，测到一半就停了。很郁闷呢

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16楼2014-08-11 21:47:40

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d00614028

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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liulugang(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-09 14:11:58
liulugang: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2014-04-09 20:34:06

可以的，我曾经做过4K与200bp的overlap，设计引物的时候注意点，在设置overlap引物的时候，假设A与B overlap，将A的反向引物设置到60bp，30bp是A上面的，30bp是B上的，B的正向引物是A的反向引物的反向互补序列，也就是最终的overlap区能达到60bp，不知道这样描述你懂了没？

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2楼2014-04-09 09:43:03

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