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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液PCR出现问题了
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rsrzrcj11

新虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-06 04:45:31
首先你描述的体系就不对，如果你这样做，你的计算存在基本错误。

另外，我感觉你模板加的有点多，我之前做一般都是1ul的o/nculture，如果时间来得及，一般我会用水洗一遍菌，去除LB和代谢的产物。

求问，怎么水洗？
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21楼2015-07-17 19:51:46
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
22楼2015-07-19 10:56:38
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sunchao1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
20楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-06 04:45:31
首先你描述的体系就不对，如果你这样做，你的计算存在基本错误。

另外，我感觉你模板加的有点多，我之前做一般都是1ul的o/nculture，如果时间来得及，一般我会用水洗一遍菌，去除LB和代谢的产物。

具体怎么用水洗一遍菌？去除LB。。。
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23楼2015-08-12 18:59:25
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草溪河

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lairongpeng at 2014-04-08 19:55:29
1.体系有问题，10μl的体系都超了，还有，既然是10ul体系为什么buffer要加5ul ? 2.你这是目的片段连T载体转化挑单克隆摇菌后的PCR把？为什么要用t载体的通用引物？不用目的片段的引物？3.做一个阳性和阴性对照吧？4 ...

Buffer 太多了，10ul 的体系加10倍的Buffer 1ul 就行了，按倍数稀释就行了

[ 发自小木虫客户端 ]
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24楼2015-08-13 13:43:34
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