应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液PCR出现问题了
53/1返回列表
查看: 3868  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sxy900803

木虫 (小有名气)

[求助] 菌液PCR出现问题了 已有14人参与

本人最近做菌液PCR，老是没有目标条带，而是像图中所示那样，是为什么呢？求助大家，帮帮忙，很急！
我的是10ul的体系：Takara的Taq酶 0.25ul,
                               dNTP mixture 1ul,
                               10xPCR Buffer 5ul,
                               引物各1ul,加灭菌蒸馏水至10ul,
                               菌液4ul.
引物用的是PMD-19T载体的通用引物：RV-M和M13-47.
恳请遇到过类似情况的童鞋帮帮忙！谢谢大家了！

菌液PCR出现问题了
}Z47[FAC0SFFJ`VZH4`J`_B.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-04-08 17:04:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rsrzrcj11

新虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-06 04:45:31
首先你描述的体系就不对，如果你这样做，你的计算存在基本错误。

另外，我感觉你模板加的有点多，我之前做一般都是1ul的o/nculture，如果时间来得及，一般我会用水洗一遍菌，去除LB和代谢的产物。

求问，怎么水洗？
回复此楼
21楼2015-07-17 19:51:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

ltfe567

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-08 17:26:18
最左侧的事DNA Marker 的条带吧？你这好像是出现非特异性条带了，是不是引物没选对呢？或者考虑下降落PCR，我也是新手，咱们互相交流
赞一下 回复此楼
2楼2014-04-08 17:06:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxy900803

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-04-08 17:06:48
最左侧的事DNA Marker 的条带吧？你这好像是出现非特异性条带了，是不是引物没选对呢？或者考虑下降落PCR，我也是新手，咱们互相交流

最左边的是Maker,之前师姐都是用的这对引物都是可以的，也不知道问题出在哪，都做了好久的实验了，啥结果都还没，急死人了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-08 18:29:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by sxy900803 at 2014-04-08 18:29:35
最左边的是Maker,之前师姐都是用的这对引物都是可以的，也不知道问题出在哪，都做了好久的实验了，啥结果都还没，急死人了
...

PCR程序有问题没？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-04-08 18:36:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭