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oliverwuwei木虫 (小有名气)
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[交流]
请教：成分分离问题
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现有两个成分，在TLC上的Rf值之差远大于0.3，但是如何分都不能得到纯品，用的是硅胶柱，石油醚和乙酸乙酯的洗脱剂。 在线急求高手出招，等着毕业呢！ |
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jingjingkitten
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2楼2008-03-01 10:29:34
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yw9833
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应该能分开
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关键是不顺利时 别急着放大量，先用小柱子摸条件，耐心多做预试，许多细节要注意，例如： 1 注意上样量不能过大，否则脱尾，难以分开 2 薄层层析展开剂的比例，不能直接套用到柱层析的洗脱剂，根据预试结果及时做适当调整。 3 柱层析洗脱液分段收集要合理，必要时分得细一些，及时配合薄层层析抽检，以免已分离的组分又混合了。 如果急于得到少量纯品，对样品量不要求太大，柱层析又确实碰到困难时，也可以试用制备薄层： 点样时要由左至右连续点样，使之成连续的线状，或条带状，而不是平时的有间距的斑点，展开后的图谱，如果分离条件好，也能得到相互分离的条带，将你需要的刮下即可，如果制备量少，比柱层析还方便。 我做过有关试验，可以成功。 请查阅有关参考书，一般专著会提到部分知识，可查找“制备薄层”部分，更重要的是要做预试，要摸分离条件，摸点样量，要注意一些细节。 制备薄层 增加制备量的方法： 可以用较宽一些的层析板，比如5cm、10cm、甚至是20cm，必要时也可以将5cm的层析板，重复制备几个，由此可以增加制备量。 |
5楼2008-03-01 23:33:08
liudan1014
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你可以尝试多种方法，有些成分的分离都是经过多种方法的反复运用才分得到的．当然你也要考虑到你的样品量，如果量太少，你选择方法要小心些，凝胶柱，ＯＤＳ柱都不太损失样品的，可以考虑使用．从ＴＬＣ上应该能看出两个化合物的类型或相似度，如果这两个物质不是同类，你可以考虑上凝胶．点了反相板，甲醇－水展开，看看分离效果怎么样，如果分离度好，你可以试试反相柱．如果用硅胶柱，你可以换换展开系统．还有如果有酚羟基，你可以试试聚酰胺．如果都不行，就试试制备薄层或干柱，制备薄层损失量大，点样和刮板要求很严格．个人认为干柱的效果比刮板好些，用比较细的硅胶填料（硅胶Ｈ），加压柱．分离化合物的方法很多，根据你化合物量的多少，可以多尝试些方法，肯定会有意想不到的收获！ |
6楼2008-03-02 18:54:08
医无止境
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8楼2008-03-03 11:46:42
oliverwuwei
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9楼2008-03-03 23:59:28
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karl2100(金币-1,VIP+0):抱歉，网络问题，重复给分了。
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该粒度的硅胶，粉末细，用于柱层析一般需要加压，否则流速太慢，被分离的谱带易扩散；加压时还需控制流速，过快也不利于分离；不加压则需更粗的硅胶。 硅胶用量是否可考虑再加大，试用30--60倍，难分离的情况高于60倍，甚至更高的也有应用。 硅胶G中的G是起粘合剂的作用，薄层层析多用；做柱层析，你看是否可试用硅胶H？ [ Last edited by zyw2008 on 2008-3-4 at 01:40 ] |
10楼2008-03-04 01:37:09
