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tennisafin

木虫 (正式写手)

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[交流] 为什么我的PCR跑出来的都是二聚体？

年前在上海生工合成了一对SCAR引物，在群体中具有很好的多态性，稳定性也很好。但是过完年，回来一跑PCR，什么产物都没有，只有二聚体，但偶尔跑的不错。不知道为什么？？？
引物一直是保存在—20C°

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1楼 2008-02-29 19:48:05

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wuyexu1205

金虫 (小有名气)

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虫号: 490916
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性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

我认为相对而言，胶和试剂影响你结果的可能性很小，到是同意3楼和1楼的看法。也就是说问题应该出在模版和酶的方面。因为：PCR试剂在分子上讲都是化学稳定结构，这是作为试剂的一个基本前提；你一个研究生倒不好琼脂糖胶是不可能的；对于TAQ酶，不同的公司的产品的技术规格不同，PCR技术总体上属于敏感性实验技术，TAQ酶虽然耐高温，但是对化学物质敏感，最怕污染，有可能是问题的根源；对于模板，就要看你严谨的程度了，如果是手抽质粒或其他DNA（RNA更是如此）作为模板，其中有很多抽提时残留的杂质，包括未除尽的蛋白，如果在习惯性的4度冰箱存放，这些导致你的模板的降解是完全可能的，更何况放置了一个寒假，你做PCR实验想必对模板进行了稀释，拿一份降解的模板稀释前又不弹匀的话，是符合你“有时做出来，有时做不出来”的情形的。