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tennisafin

木虫 (正式写手)

[交流] 为什么我的PCR跑出来的都是二聚体?

年前在上海生工合成了一对SCAR引物,在群体中具有很好的多态性,稳定性也很好。但是过完年,回来一跑PCR,什么产物都没有,只有二聚体,但偶尔跑的不错。不知道为什么???
引物一直是保存在—20C°
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
asr(金币+2,VIP+0)::P very good,欢迎常来交流!
你说的情况可以肯定不是引物的问题,如果2楼的因素排除后,最大的可能是就是模板了,我个人认为dNTP的可能性最小!!
3楼2008-03-01 19:25:08
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dreamsail

银虫 (正式写手)

★ ★
asr(金币+2,VIP+0)::P 多谢,欢迎常来交流!
我遇到这样的问题一般把酶和DNTP都换新的,你试下看。
2楼2008-03-01 10:29:40
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人


asr(金币+1,VIP+0)::P
模板问题,做新模板吧
细推物理须行乐。
4楼2008-03-01 19:39:59
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annwt

木虫 (正式写手)

★ ★
asr(金币+2,VIP+0)::P very good,欢迎常来交流!
以前我曾经用过上海生工的RAPD引物,2 OD的,由于有问题,他们给换货了,不过他们讲,关于这种短的引物,高OD的会出问题,建议我用0.5OD的,不知道为什么。
至于你的试验,我看可以先从对照入手,分析排出原因,
第一是酶和体系是第一,看其他同学的PCR结果。
第二是模板,扩熟悉的。
第三是引物,我当初就是用事实与生工打交道,他们挺讲理的。
最后希望你尽快解决问题。
5楼2008-03-01 21:12:30
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