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tennisafin木虫 (正式写手)
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[交流]
为什么我的PCR跑出来的都是二聚体？
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年前在上海生工合成了一对SCAR引物，在群体中具有很好的多态性，稳定性也很好。但是过完年，回来一跑PCR，什么产物都没有，只有二聚体，但偶尔跑的不错。不知道为什么？？？ 引物一直是保存在—20C° |
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2楼2008-03-01 10:29:40
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3楼2008-03-01 19:25:08
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4楼2008-03-01 19:39:59
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5楼2008-03-01 21:12:30
6楼2008-03-01 21:57:36
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7楼2008-03-02 10:58:17
8楼2008-03-02 12:06:14
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| 我认为相对而言，胶和试剂影响你结果的可能性很小，到是同意3楼和1楼的看法。也就是说问题应该出在模版和酶的方面。因为：PCR试剂在分子上讲都是化学稳定结构，这是作为试剂的一个基本前提；你一个研究生倒不好琼脂糖胶是不可能的；对于TAQ酶，不同的公司的产品的技术规格不同，PCR技术总体上属于敏感性实验技术，TAQ酶虽然耐高温，但是对化学物质敏感，最怕污染，有可能是问题的根源；对于模板，就要看你严谨的程度了，如果是手抽质粒或其他DNA（RNA更是如此）作为模板，其中有很多抽提时残留的杂质，包括未除尽的蛋白，如果在习惯性的4度冰箱存放，这些导致你的模板的降解是完全可能的，更何况放置了一个寒假，你做PCR实验想必对模板进行了稀释，拿一份降解的模板稀释前又不弹匀的话，是符合你“有时做出来，有时做不出来”的情形的。 |
9楼2008-03-02 13:04:07
tennisafin
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10楼2008-03-02 22:15:08