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digest 之后dna消失，找不到原因了，求助
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after double digesting with Bamh and NdeI all my dna was gone 1. BSA(10) 3ul, buffer 3 3ul, dH2O 12 ul, DNA 5ul, Bamh 1ul, NdeI 1ul 2. BSA(10) 3ul, buffer 2 3ul, dH2O 12 ul, DNA 5ul, Bamh 1ul, NdeI 1ul 3. BSA(10) 3ul, buffer 3 3ul, dH2O 12 ul, DNA 5ul 4. BSA(10) 1ul, buffer 6 1ul, dH2O 6.5 ul, DNA 2ul, Bamh 0.5ul, NdeI 0.5ul 37C, 1h after running the gel, I can only find band in 3, which is the control it's really hard for me to figure it out, because I already changed the amount in 4, and changed different buffers, and I reduced the digestion time to 1h, so what happened to my DNA? I really need help here. Many thanks!! plus, I added the BSA buffer and ddwater first, DNA second, and added the enzyme at last |
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ganchao1776
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swingsinsky(金币+2,VIP+0):thanks
swingsinsky(金币+2,VIP+0):thanks
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如果你的酶在你基因的中间没有酶切位点，你的buffer配比正确，按我下边的体系切一下试试！！ BSA(10) 2ul, buffer 2 2ul, dH2O 4ul, DNA 8ul, Bamh 1ul, NdeI 1ul 实验中一些意想不到的原因也能使你看不到亮带，紫外灯的功率，透光板是否干净， golden view的染色效果不如EB 我个人认为你实验看不到亮带的最主要原因是DNA量太少了，不过建议你把Bamh I换了，这个酶的酶切效率太低了，Nde I我没用过 另外在设计引物的时候一定要多设计几个保护碱基！！ |
11楼2008-03-01 20:18:15
2楼2008-02-29 10:50:27
3楼2008-02-29 11:07:15
wangjiasi
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