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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western曝光时间过长是什么原因？
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小红豆120

新虫 (初入文坛)

[求助] western曝光时间过长是什么原因？ 已有2人参与

我和别人一起做的western，检测同一个蛋白，加样量和抗体什么的都一样的，一起跑的电泳和转膜，但是问什么他的曝光时间只有几秒钟，而我的曝光时间有300s呢？有蛋白曝光出来，但就是时间过长，求大神解答，感激不尽！
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1楼 2014-04-04 15:15:55
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小红豆120(youlinglyw代发): 金币+2 2014-04-04 21:31:53
小红豆120: 金币+8, ★★★很有帮助 2014-04-08 13:55:54
所有的东西都一样么？包括是在一起跑的？一起转膜的？转膜的效率是一样的么？配的胶的浓度时一样不？胶浓度不一样也会导致转膜效率不一样。
既然你和别人的检测样品是一样的，直接做个对照试验，把他的样品拿过来，然后你自己再把你的样品和他的样品重新都跑一次，记得跑在同一块胶上，然后做上Actin内参的对照，看曝光怎么样。
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2楼2014-04-04 15:52:38
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能是上样量不同！
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3楼2014-04-04 17:05:39
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小红豆120

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liuderong at 2014-04-04 17:05:39
有可能是上样量不同！

上样量都是20uL
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4楼2014-04-08 13:56:15
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小红豆120 at 2014-04-08 13:56:15
上样量都是20uL...

我说的是蛋白的量。虽然同是20微升，但如果浓度差异很大，那结果也会有很大差异的。
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5楼2014-04-08 15:06:26
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小红豆120

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liuderong at 2014-04-08 15:06:26
我说的是蛋白的量。虽然同是20微升，但如果浓度差异很大，那结果也会有很大差异的。...

蛋白量也是一样的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2014-04-08 16:44:17
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pumaatlarge

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
7楼2014-04-08 20:24:53
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huiting410

金虫 (著名写手)
比如你洗膜是很剧烈，或者膜翻了，都会对结果有影响，你加的ECL底物的量，转膜的电流都会对结果造成影响
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8楼2014-04-09 15:23:51
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小红豆120

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by huiting410 at 2014-04-09 15:23:51
比如你洗膜是很剧烈，或者膜翻了，都会对结果有影响，你加的ECL底物的量，转膜的电流都会对结果造成影响

谢谢！
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9楼2014-04-09 16:11:23
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