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小红豆120

新虫 (初入文坛)

[求助] western曝光时间过长是什么原因? 已有2人参与

我和别人一起做的western,检测同一个蛋白,加样量和抗体什么的都一样的,一起跑的电泳和转膜,但是问什么他的曝光时间只有几秒钟,而我的曝光时间有300s呢?有蛋白曝光出来,但就是时间过长,求大神解答,感激不尽!
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小红豆120(youlinglyw代发): 金币+2 2014-04-04 21:31:53
小红豆120: 金币+8, ★★★很有帮助 2014-04-08 13:55:54
所有的东西都一样么?包括是在一起跑的?一起转膜的?转膜的效率是一样的么?配的胶的浓度时一样不?胶浓度不一样也会导致转膜效率不一样。
既然你和别人的检测样品是一样的,直接做个对照试验,把他的样品拿过来,然后你自己再把你的样品和他的样品重新都跑一次,记得跑在同一块胶上,然后做上Actin内参的对照,看曝光怎么样。
2楼2014-04-04 15:52:38
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能是上样量不同!
3楼2014-04-04 17:05:39
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小红豆120

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liuderong at 2014-04-04 17:05:39
有可能是上样量不同!

上样量都是20uL
4楼2014-04-08 13:56:15
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小红豆120 at 2014-04-08 13:56:15
上样量都是20uL...

我说的是蛋白的量。虽然同是20微升,但如果浓度差异很大,那结果也会有很大差异的。
5楼2014-04-08 15:06:26
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小红豆120

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by liuderong at 2014-04-08 15:06:26
我说的是蛋白的量。虽然同是20微升,但如果浓度差异很大,那结果也会有很大差异的。...

蛋白量也是一样的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2014-04-08 16:44:17
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pumaatlarge

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

7楼2014-04-08 20:24:53
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huiting410

金虫 (著名写手)

比如你洗膜是很剧烈,或者膜翻了,都会对结果有影响,你加的ECL底物的量,转膜的电流都会对结果造成影响
8楼2014-04-09 15:23:51
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小红豆120

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by huiting410 at 2014-04-09 15:23:51
比如你洗膜是很剧烈,或者膜翻了,都会对结果有影响,你加的ECL底物的量,转膜的电流都会对结果造成影响

谢谢!
9楼2014-04-09 16:11:23
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