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[交流]
[交流求助] 有做过RT-PCR的同志请进来一下，请教些问题
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我想确定我的基因中是否有内含子，所以就想做一下RT-PCR，上网查了一些资料，但还是不知道改怎么做，我计划用试剂盒，但有些问题： 1、同一基因的RT-RCP的引物和PCR的引物是一样的吗？若不同，RT-PCR的引物应如何设计（最好不要用软件）？ 2、用试剂盒的话，是不是还要自己先提取mRNA？ 3、在实验过程中应该注意什么？ 4、我的基因序列已知，那我做RT-PCR大约需要多长时间？ 5、是不是有一种竞争性RT-PCR可以定量分析基因在细胞中的表达水平？我是否可以与RT-PCR一同做了？ 6、我们实验室的试剂盒放了有两年了，是不是不能用了？  |
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annwt
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如果我没有理解错，你应该作过基因组的PCR，怀疑基因比目前得到的序列短。是否有内含子，如果为找内含子，你应该先到NCBI的EST比对你的序列就知道是否有内含子了。至于你的问题，我的建议是： 1，应该熟悉软件设计引物，这是基本功。 2，你的RT试剂盒应该是包括mRNA提取。放两年的试剂盒应该太久了，如果还要进这种试剂盒的话，用它练习试验，熟悉操作过程还是可以的。 3，定量PCR比较贵，建议试验没有设计周密前不要作。 最后，分子生物学试验要快可快，要是不出结果，也很正常，愿你多来这里交流，分享你的快乐与问题。 [ Last edited by annwt on 2008-2-28 at 17:30 ] |
2楼2008-02-28 17:28:56
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