| 查看: 499 | 回复: 5 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
[交流求助] 有做过RT-PCR的同志请进来一下，请教些问题
|
|||
|
我想确定我的基因中是否有内含子，所以就想做一下RT-PCR，上网查了一些资料，但还是不知道改怎么做，我计划用试剂盒，但有些问题： 1、同一基因的RT-RCP的引物和PCR的引物是一样的吗？若不同，RT-PCR的引物应如何设计（最好不要用软件）？ 2、用试剂盒的话，是不是还要自己先提取mRNA？ 3、在实验过程中应该注意什么？ 4、我的基因序列已知，那我做RT-PCR大约需要多长时间？ 5、是不是有一种竞争性RT-PCR可以定量分析基因在细胞中的表达水平？我是否可以与RT-PCR一同做了？ 6、我们实验室的试剂盒放了有两年了，是不是不能用了？  |
回复此楼» 猜你喜欢
拟解决的关键科学问题还要不要写
已经有8人回复
-
最失望的一年
已经有17人回复
-
为什么nbs上溴 没有产物点出现呢
已经有6人回复
-
求推荐博导
已经有4人回复
-
存款400万可以在学校里躺平吗
已经有34人回复
-
求助一下有机合成大神
已经有4人回复
-
求推荐英文EI期刊
已经有5人回复
-
26申博
已经有3人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有10人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
annwt
木虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 4669.9
- 散金: 119
- 红花: 5
- 帖子: 697
- 在线: 257.2小时
- 虫号: 400594
- 注册: 2007-06-12
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
★ ★ ★
asr(金币+3,VIP+0)::P 多谢分享宝贵经验，常来交流！
asr(金币+3,VIP+0)::P 多谢分享宝贵经验，常来交流！
|
如果我没有理解错，你应该作过基因组的PCR，怀疑基因比目前得到的序列短。是否有内含子，如果为找内含子，你应该先到NCBI的EST比对你的序列就知道是否有内含子了。至于你的问题，我的建议是： 1，应该熟悉软件设计引物，这是基本功。 2，你的RT试剂盒应该是包括mRNA提取。放两年的试剂盒应该太久了，如果还要进这种试剂盒的话，用它练习试验，熟悉操作过程还是可以的。 3，定量PCR比较贵，建议试验没有设计周密前不要作。 最后，分子生物学试验要快可快，要是不出结果，也很正常，愿你多来这里交流，分享你的快乐与问题。 [ Last edited by annwt on 2008-2-28 at 17:30 ] |
2楼2008-02-28 17:28:56
coldspringzhang
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 345
- 帖子: 43
- 在线: 18.3小时
- 虫号: 426234
- 注册: 2007-07-28
- 性别: GG
- 专业: 人类营养
3楼2008-02-28 20:54:52
4楼2008-02-29 10:47:39
playboy723
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 783.3
- 帖子: 352
- 在线: 43.3小时
- 虫号: 344753
- 注册: 2007-04-14
- 性别: GG
- 专业: 遗传学和分子生物学
5楼2008-02-29 15:23:08
ganchao1776
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 11174.1
- 散金: 1811
- 红花: 30
- 帖子: 3390
- 在线: 900.6小时
- 虫号: 330935
- 注册: 2007-03-24
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2008-03-02 15:22:49