应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 小试表达，中试不表达是什么原因
91/1返回列表
查看: 1258  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cao534

银虫 (正式写手)

[求助] 小试表达，中试不表达是什么原因 已有3人参与

最近在做重组菌发酵，pet28a/BL21(DE3),氨苄抗性，摇瓶和10L发酵罐多次试验均有目的蛋白表达，但是做100L的时候发酵菌体收率比10L要高，但是菌体离心不实，也没有目的蛋白的表达，种子库使用的事甘油管，重组接摇瓶还是能表达，各位大侠知道是怎么回事吗？

[ Last edited by gyesang on 2014-4-3 at 11:55 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-04-03 11:38:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lotusx

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励新虫应助！ 2014-05-07 23:31:46
cao534: 金币+1, ★有帮助 2014-06-06 08:41:52
菌体离心不实 可能是菌体老化了，自溶出来的蛋白酶把目的蛋白降解了~
赞一下 回复此楼
2楼2014-04-03 17:55:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cao534

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lotusx at 2014-04-03 17:55:22
菌体离心不实 可能是菌体老化了，自溶出来的蛋白酶把目的蛋白降解了~

中间监控，诱导6h时也没有目的蛋白表达
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-04 10:13:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wyz5527

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励新虫应助！ 2014-05-07 23:32:11
cao534: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-06-06 08:42:07
菌体离心不实我觉得不是老化自溶，反而是过快生长，况且发酵放大时，罐越大培养基浓度应当同比例适当降低，而不是同比例不变。再就是诱导剂添加时机、添加方式、添加量也影响比较大，毕竟诱导剂对菌来说是有毒性的
赞一下 回复此楼
简练才是真正的丰富
4楼2014-05-07 16:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wyz5527

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有蛋白类的产物往往跟ph有很大关系，因为很多酶需要在某个ph产生、发生作用，尤其菌入罐初期，是合成相应酶系的关键时刻，不同的初始ph、氮源浓度（个人认为此时氮源起主要作用）会产生不同的酶系，对后面的产物有较大影响
赞一下 回复此楼
简练才是真正的丰富
5楼2014-05-07 17:04:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
现在做的怎么样呀，pET28a是卡那抗性的。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-06-05 09:57:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cao534

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ganchao1776 at 2014-06-05 09:57:59
现在做的怎么样呀，pET28a是卡那抗性的。

现在问题解决了，不过新问题又来了
赞一下 回复此楼
7楼2014-06-05 16:04:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小花木兰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

怎解决呀，现在有什么问题呢
赞一下 回复此楼
8楼2014-06-05 16:37:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cao534

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小花木兰 at 2014-06-05 16:37:41
怎解决呀，现在有什么问题呢

移种管路有1处死角，每次移种就会发生染菌，摇瓶做种子酒不会出现问题，但是最近不知怎么的，菌种张不起来，是新制备的感受态转化的菌体，接种后6-8h溶氧上升，菌体停止生长，种子检测过了没有我问题，培养基没有换过，离心收集少量的菌体，表达量也没有以前的高
赞一下 回复此楼
9楼2014-06-06 15:16:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cao534 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗 +3 否极泰来2026 2026-04-15 4/200 2026-04-16 08:47 by 不会吃肉
[考研] 22408 312求调剂 +20 门路摸摸 2026-04-14 21/1050 2026-04-15 20:39 by cuisz
[考研] 一志愿华中农业071010，320求调剂 +11 困困困困坤坤 2026-04-14 12/600 2026-04-15 18:58 by zhuwenxu
[考研] 生物学调剂 +9 纸扇zhishan 2026-04-13 9/450 2026-04-15 18:28 by AN流800
[考研] 材料专业344求调剂 +17 hualkop 2026-04-10 22/1100 2026-04-14 16:21 by sxdj2
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
[基金申请] RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一 +6 zju2000 2026-04-14 17/850 2026-04-14 14:34 by jurkat.1640
[考研] 290求调剂 +18 柯淮然 2026-04-12 20/1000 2026-04-13 12:56 by cyh—315
[考研] 生物学调剂 +11 小冉要努力 2026-04-10 13/650 2026-04-13 11:46 by 电化学及催化
[考研] 2本，初试303，0860求调剂 +6 floriea 2026-04-12 8/400 2026-04-12 18:13 by zhouxiaoyu
[考研] 339求调剂 +8 hanwudada 2026-04-11 9/450 2026-04-12 15:36 by laoshidan
[考研] 280求调剂 +13 wzzz王 2026-04-09 13/650 2026-04-12 00:31 by 勇攀高峰0126
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 11/550 2026-04-11 19:57 by 逆水乘风
[考研] 283求调剂 086004考英二数二 +17 那个噜子 2026-04-10 18/900 2026-04-11 16:27 by 明月此时有
[考研] 0854调剂 +8 950824he@ 2026-04-09 8/400 2026-04-11 10:11 by zhq0425
[考研] 0854调剂 +4 长弓傲 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:18 by 猪会飞
[考研] 265求调剂 +12 风说她早忘了 2026-04-10 13/650 2026-04-10 18:56 by chemisry
[考研] 282，电气工程专业，求调剂，不挑专业 +9 jggshjkkm 2026-04-10 9/450 2026-04-10 14:55 by 逆水乘风
[考研] 求调剂 材料与工程 324分 专硕 +19 翩翩一书生 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 11:41 by wp06
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭