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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 天根Pfu Mix错配率问题
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zep616745243

银虫 (小有名气)

[求助] 天根Pfu Mix错配率问题 已有2人参与

用天根Pfu Mix克隆1.1kb的片段，准备用于后期表达，测序发现错配10个碱基，这个比例很大吗，可以用于后期表达吗，小虫一枚，求大神指导
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只有不断地失败才会成功
1楼 2014-04-01 20:56:27
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283503264

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没经验 但感觉好大啊

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Action is the food and drink which will nourish my success.
2楼2014-04-02 00:25:54
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励回帖交流 2014-04-02 08:34:18
能不能用于表达，要看你的氨基酸序列变了没有
不过这个错配率实在是太高了，你还是查查具体的原因，就是一般的taq酶，估计也没有这么高的错配率
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3楼2014-04-02 00:47:08
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zep616745243

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoweiwei121 at 2014-04-02 00:47:08
能不能用于表达，要看你的氨基酸序列变了没有
不过这个错配率实在是太高了，你还是查查具体的原因，就是一般的taq酶，估计也没有这么高的错配率

我用的是放了10天的cDNA，PCR循环33，打算换新的模板，再降低下PCR循环试试，thank you~~
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只有不断地失败才会成功
4楼2014-04-02 16:29:20
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zep616745243

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 283503264 at 2014-04-02 00:25:54
没经验 但感觉好大啊

额，还是再优化下吧
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只有不断地失败才会成功
5楼2014-04-02 16:30:09
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
引用回帖:
4楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-02 16:29:20
我用的是放了10天的cDNA，PCR循环33，打算换新的模板，再降低下PCR循环试试，thank you~~...

cDNA 放在-20度 没什么问题，这个错配， 可能直接来自于你的模板
或者是你的pcr的Mg2+浓度太高了
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6楼2014-04-03 00:45:49
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新乐府

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
7楼2019-12-11 18:34:41
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