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zep616745243

银虫 (小有名气)

[求助] 天根Pfu Mix错配率问题 已有2人参与

用天根Pfu Mix克隆1.1kb的片段,准备用于后期表达,测序发现错配10个碱基,这个比例很大吗,可以用于后期表达吗,小虫一枚,求大神指导
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

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引用回帖:
4楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-02 16:29:20
我用的是放了10天的cDNA,PCR循环33,打算换新的模板,再降低下PCR循环试试,thank you~~...

cDNA 放在-20度 没什么问题,这个错配, 可能直接来自于你的模板
或者是你的pcr的Mg2+浓度太高了
6楼2014-04-03 00:45:49
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283503264

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
没经验 但感觉好大啊

[ 发自小木虫客户端 ]
Action is the food and drink which will nourish my success.
2楼2014-04-02 00:25:54
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xiaoweiwei121

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这潭水蓝的深邃

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【答案】应助回帖

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励回帖交流 2014-04-02 08:34:18
能不能用于表达,要看你的氨基酸序列变了没有
不过这个错配率实在是太高了,你还是查查具体的原因,就是一般的taq酶,估计也没有这么高的错配率
3楼2014-04-02 00:47:08
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zep616745243

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoweiwei121 at 2014-04-02 00:47:08
能不能用于表达,要看你的氨基酸序列变了没有
不过这个错配率实在是太高了,你还是查查具体的原因,就是一般的taq酶,估计也没有这么高的错配率

我用的是放了10天的cDNA,PCR循环33,打算换新的模板,再降低下PCR循环试试,thank you~~
只有不断地失败才会成功
4楼2014-04-02 16:29:20
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