| 查看: 1053 | 回复: 5 | |||
[求助]
删除几个核苷酸用质粒扩增诱变可以吗？ 已有3人参与
|
|
我看到质粒扩增诱变基本是做把一个点变成另一个，我想要删掉几个核苷酸，也就编码4~5个氨基酸的长度，是不是引物设计的时候去掉就可以了，还是以删除的位点为中心设计引物吗？ 除了这个方法，还有什么简单的方法可以做到定点除去一个片段？ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有131人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 一种比较详细的PCR技术
已经有10人回复
- 微生物学考研资料1(沈萍版同步）免币分享
已经有67人回复
lihe131
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 106 (高中生)
- 金币: 12400.9
- 散金: 3690
- 红花: 10
- 帖子: 14218
- 在线: 263.6小时
- 虫号: 504554
- 注册: 2008-02-16
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2014-04-01 16:51:56
3楼2014-04-01 20:29:46
lihe131
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 106 (高中生)
- 金币: 12400.9
- 散金: 3690
- 红花: 10
- 帖子: 14218
- 在线: 263.6小时
- 虫号: 504554
- 注册: 2008-02-16
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2014-04-01 23:31:19
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7753.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
5楼2014-04-02 08:47:20
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
天湖酒(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-02 09:46:23
感谢参与，应助指数 +1
天湖酒(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-02 09:46:23
|
看你的回复，应该是在用基于甲基化降解(DpnI)的突变试剂盒 这种试剂盒设计引物的时候要完全互补，扩展之后加入DpnI，降解模板 你注意看一下说明书吧，删除碱基的引物设计应该也是把删除的片段置于引物中间 不过一次4-5个碱基会造成突变效率下降的 还有一类突变试剂盒是PCR后再连接的，引物设计是邻接的，连接之后是一个完整的质粒。 这样的试剂盒，做删除突变就比较容易，而且也没有碱基长度的限制，不过要求引物合成的时候5‘磷酸化 同时需要有一个能扩增长片段的高保真酶 如果没有试剂盒，也没有能扩增长片段的高保真酶，那么你可以在要删除位点附近，寻找单酶切位点，然后像做重组克隆一样，把质粒双酶切，然后再连入删除了碱基的序列（这个可能要用到OverlapPCR） |
6楼2014-04-02 09:37:43
