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删除几个核苷酸用质粒扩增诱变可以吗？ 已有3人参与
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我看到质粒扩增诱变基本是做把一个点变成另一个，我想要删掉几个核苷酸，也就编码4~5个氨基酸的长度，是不是引物设计的时候去掉就可以了，还是以删除的位点为中心设计引物吗？ 除了这个方法，还有什么简单的方法可以做到定点除去一个片段？ |
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5楼2014-04-02 08:47:20
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看你的回复，应该是在用基于甲基化降解(DpnI)的突变试剂盒 这种试剂盒设计引物的时候要完全互补，扩展之后加入DpnI，降解模板 你注意看一下说明书吧，删除碱基的引物设计应该也是把删除的片段置于引物中间 不过一次4-5个碱基会造成突变效率下降的 还有一类突变试剂盒是PCR后再连接的，引物设计是邻接的，连接之后是一个完整的质粒。 这样的试剂盒，做删除突变就比较容易，而且也没有碱基长度的限制，不过要求引物合成的时候5‘磷酸化 同时需要有一个能扩增长片段的高保真酶 如果没有试剂盒，也没有能扩增长片段的高保真酶，那么你可以在要删除位点附近，寻找单酶切位点，然后像做重组克隆一样，把质粒双酶切，然后再连入删除了碱基的序列（这个可能要用到OverlapPCR） |
6楼2014-04-02 09:37:43