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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 求助WB实验问题
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五味子915

金虫 (小有名气)

[交流] 求助WB实验问题

我要做的目的蛋白有两个，分子量分别为28KD、57KD,用6%积层胶，12%的分离胶，电压分别为100V、150V，电泳2小时左右，溴酚蓝未跑出凝胶下端，结束后用考马斯亮蓝染色，溴酚蓝所在部位有一条宽宽的带，透明，似乎未染上色，其余地方均匀蓝色，但未见条带，请问这是怎么回事。
原来怀疑蛋白标本有问题，但是重新测了一下浓度，基本上都在1-2微克/微升，蛋白Marker也看不到应有的条带，配胶用的40%（37.5：1）丙烯酰胺
溶液，1.0M的Tris-cl，10%SDS都是新近配置的，pH值调整很仔细，不知道问题出在哪了，急切盼望您的帮助和指导，谢谢！！！
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许多年以前，盼着数不清的以后；许多年以后，恋着唤不回的从前
1楼 2008-02-27 11:48:28
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sofier

那会不会是你的考马有问题？是用的R250吗？
另外预染marker在跑胶的时候都该看的到啊，如果当时都没有的话，估计是胶的问题了。
再或者你用的是精确分子量marker，考马没有问题，暂时不考虑胶的话，那上样量有多少呢？是不是足够？
通常1.5mm厚的板我们实验室在做WB时候上样至少有40ug每孔的。做出来的图也还是比较漂亮.
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3楼2008-10-04 10:32:26
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deity214

铁虫 (小有名气)
蛋白Marker也看不到应有的条带

如果不是预染的marker，染色是看不到的，
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2楼2008-08-12 09:07:44
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