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求助WB实验问题
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我要做的目的蛋白有两个,分子量分别为28KD、57KD,用6%积层胶,12%的分离胶,电压分别为100V、150V,电泳2小时左右,溴酚蓝未跑出凝胶下端,结束后用考马斯亮蓝染色,溴酚蓝所在部位有一条宽宽的带,透明,似乎未染上色,其余地方均匀蓝色,但未见条带,请问这是怎么回事。 原来怀疑蛋白标本有问题,但是重新测了一下浓度,基本上都在1-2微克/微升,蛋白Marker也看不到应有的条带,配胶用的40%(37.5:1)丙烯酰胺 溶液,1.0M的Tris-cl,10%SDS都是新近配置的,pH值调整很仔细,不知道问题出在哪了,急切盼望您的帮助和指导,谢谢!!! |
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