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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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五味子915

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[交流] 求助WB实验问题

我要做的目的蛋白有两个,分子量分别为28KD、57KD,用6%积层胶,12%的分离胶,电压分别为100V、150V,电泳2小时左右,溴酚蓝未跑出凝胶下端,结束后用考马斯亮蓝染色,溴酚蓝所在部位有一条宽宽的带,透明,似乎未染上色,其余地方均匀蓝色,但未见条带,请问这是怎么回事。
原来怀疑蛋白标本有问题,但是重新测了一下浓度,基本上都在1-2微克/微升,蛋白Marker也看不到应有的条带,配胶用的40%(37.5:1)丙烯酰胺
溶液,1.0M的Tris-cl,10%SDS都是新近配置的,pH值调整很仔细,不知道问题出在哪了,急切盼望您的帮助和指导,谢谢!!!
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许多年以前,盼着数不清的以后;许多年以后,恋着唤不回的从前
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deity214

管理员

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蛋白Marker也看不到应有的条带

如果不是预染的marker,染色是看不到的,
2楼2008-08-12 09:07:44
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sofier

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

那会不会是你的考马有问题?是用的R250吗?
另外预染marker在跑胶的时候都该看的到啊,如果当时都没有的话,估计是胶的问题了。
再或者你用的是精确分子量marker,考马没有问题,暂时不考虑胶的话,那上样量有多少呢?是不是足够?
通常1.5mm厚的板我们实验室在做WB时候上样至少有40ug每孔的。做出来的图也还是比较漂亮.
3楼2008-10-04 10:32:26
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