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ChIP实验DNA超声破碎打不断怎么回事?
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1990_feiyu
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[交流]
ChIP实验DNA超声破碎打不断怎么回事?
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如标题啊,我是做蓝藻的,找DNA-蛋白结合位点,可是DNA破碎一步就是做不出来,我是把100ml的菌液(OD730=0.6)回收做细胞破碎,离心上清用实验室的仪器做超声,可就是没反应,超与不超是一样的条带,但是把DNA纯化出来就能超碎,有没有谁知道是为什么呢,是不是我哪一步做错了,一个月了,我是新手,有相关经验的帮忙指点一下。
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1楼
2014-03-31 22:14:18
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taojun
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7楼
:
Originally posted by
feiyu_1990
at 2014-07-21 10:46:48
我的程序是10 s,30 s ice,20%功率,型号是东芝JY99-IIDN,其实这个是标配大探头的,我们实验室只有这个仪器,安了个2mm的小探头,是不是仪器的问题,还总是不工作,主机响,能量传不到探头,一换水就好了,我的样 ...
说明你的细菌膜太厚了,我的样本是线虫,我的程序是10 on,59.9off,功率是50%,一共20次,我看了条带都是200-800的!
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8楼
2014-07-22 08:59:18
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taojun
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2014-07-04 23:10:04
你往菌液里面加点SDS LYSIS BUFFER就可以了
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2楼
2014-05-06 17:24:53
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流
2014-07-05 19:08:06
可能是你的细胞结构的问题,要么选择裂解细胞,要么就选择增加超生破碎的次数,应该可以吧
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3楼
2014-05-07 03:47:11
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feiyu_1990
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专业: 化学反应工程
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流
2014-07-05 19:08:18
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2楼
:
Originally posted by
taojun
at 2014-05-06 17:24:53
你往菌液里面加点SDS LYSIS BUFFER就可以了
我是先将细胞破碎完,离心取上清再超声的,前一阵往里加了融膜的Triton X-100,变成部分能超碎了,一部分在下面弥散的带,一部分还是在未超声DNA基因组那,这个是为什么呢?
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4楼
2014-07-04 20:19:46
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