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金娜儿

新虫 (初入文坛)

[求助] rna电泳 已有2人参与

RNA变性电泳中1.制备agarose凝胶板：用MOPS～甲醛电极buffer配制1%～1.2%的Agarose，沸水浴融化，冷却至～60℃，铺板，湿度盒中保存备用（不能过夜）。
2.制备样品：3～5μl悬浮溶解的RNA,加样品处理液3～5μl，65℃加热15分钟，冰上冷却，再加3～5μl RNA-loading buffer,混匀，根据RNA浓度确定使用量。
3.上样：将制备样品用10μl移液器小心慢慢的加入样品槽中，不得溢出悬浮。
第二歩的样品处理液是什么？
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1楼 2014-03-31 08:12:21
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左眼皮跳跳DJ

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-03-31 08:27:58
买个试剂盒就行了，自已弄的不靠谱
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我想要怒放的生命
2楼2014-03-31 08:18:42
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
formaldehyde agarose gel的loading buffer跟普通的RNA denaturing buffer成分差不多，就是多了一个formaldehyde。
我建议你直接配一个这样的loading buffer：
5x RNA loading buffer
16 μl saturated aqueous bromophenol blue solution
80 μl 500 mM EDTA, pH 8.0
720 μl 37% (12.3 M) formaldehyde
2 ml 100% glycerol
3.084 ml formamide
4 ml 10 x FA gel buffer
这个是Qiagen推荐的改良版formaldehyde 5X loading buffer，较传统的2X loading buffer有了很大的改进。
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3楼2014-03-31 09:35:55
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