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金娜儿新虫 (初入文坛)
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rna电泳 已有2人参与
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RNA变性电泳中1.制备agarose凝胶板：用MOPS～甲醛电极buffer配制1%～1.2%的Agarose，沸水浴融化，冷却至～60℃，铺板，湿度盒中保存备用（不能过夜）。 2.制备样品：3～5μl悬浮溶解的RNA,加样品处理液3～5μl，65℃加热15分钟，冰上冷却，再加3～5μl RNA-loading buffer,混匀，根据RNA浓度确定使用量。 3.上样：将制备样品用10μl移液器小心慢慢的加入样品槽中，不得溢出悬浮。 第二歩的样品处理液是什么？ |
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2楼2014-03-31 08:18:42
biostar2009
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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formaldehyde agarose gel的loading buffer跟普通的RNA denaturing buffer成分差不多，就是多了一个formaldehyde。 我建议你直接配一个这样的loading buffer： 5x RNA loading buffer 16 μl saturated aqueous bromophenol blue solution 80 μl 500 mM EDTA, pH 8.0 720 μl 37% (12.3 M) formaldehyde 2 ml 100% glycerol 3.084 ml formamide 4 ml 10 x FA gel buffer 这个是Qiagen推荐的改良版formaldehyde 5X loading buffer，较传统的2X loading buffer有了很大的改进。 |
3楼2014-03-31 09:35:55