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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酶反应时，酶的浓度过高会影响底物的紫外吸收吗？？？及时发金币的。
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wenrongti

新虫 (小有名气)

[求助] 酶反应时，酶的浓度过高会影响底物的紫外吸收吗？？？及时发金币的。 已有2人参与

细胞破碎之后，离心除去菌体，取上清液，即粗酶液，用粗酶液做参比，在1ml粗酶液中加入适当的底物，再用紫外扫描，发现底物没有吸收峰，基本都是平的，接着我就对粗酶液稀释一定的倍数之后，再加入我的底物，这时就有峰了，我的问题是酶的浓度高时，底物的紫外吸收会受到影响吗？？？
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1楼 2014-03-26 18:14:55
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wenrongti

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by softwind-77 at 2014-03-31 20:52:34
通常情况下底物与酶反应，需要底物与酶形成瞬间的结合，然后分开，这样一个过程，也就是我们说的酶反应动力学，如果酶与底物的结合域，使得酶正好把底物包裹住，类似于发卡结构，这样的话酶浓度过高就会掩盖了底物的 ...

请教下朋友，你坐酶实验是如何做的？需要加辅酶吗？如何来选辅酶？
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9楼2014-04-01 18:14:11
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普通回帖

l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wenrongti: 金币+3, ★有帮助 2014-03-26 19:10:12
wenrongti: 金币+3, ★有帮助 2014-03-27 17:47:58
会，但要具体分析你用的什么酶，什么底物，什么产物，什么缓冲液
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相信自己
2楼2014-03-26 18:53:03
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wenrongti

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by l68266152 at 2014-03-26 18:53:03
会，但要具体分析你用的什么酶，什么底物，什么产物，什么缓冲液

但我的参比本身也是粗酶啊，消除了酶对紫外吸收的影响啊，底物还是没有吸收。缓冲液是磷酸盐溶液，酶就是用我的底物诱导的酶，没有细胞破碎之前底物是可以降解的。你能再具体解释下，酶怎么就会对底物的紫外吸收造成影响呢？为什么底物加到粗酶里面扫出来是平的？？
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3楼2014-03-26 19:10:03
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l68266152

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wenrongti at 2014-03-26 19:10:03
但我的参比本身也是粗酶啊，消除了酶对紫外吸收的影响啊，底物还是没有吸收。缓冲液是磷酸盐溶液，酶就是用我的底物诱导的酶，没有细胞破碎之前底物是可以降解的。你能再具体解释下，酶怎么就会对底物的紫外吸收造 ...

是做的紫外全波长扫描么？“平的”时候吸光值是多少？
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4楼2014-03-27 12:33:53
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wenrongti

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by l68266152 at 2014-03-27 12:33:53
是做的紫外全波长扫描么？“平的”时候吸光值是多少？...

是的，全波段，平的时候略微有点吸收，但很小，就没注意了，是没事原因呢？进了下液相，发现我的底物还在，浓度基本也没有变化的，为什么会没有吸收呢？？？请教下你啊
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5楼2014-03-27 17:47:32
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l68266152

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wenrongti at 2014-03-27 17:47:32
是的，全波段，平的时候略微有点吸收，但很小，就没注意了，是没事原因呢？进了下液相，发现我的底物还在，浓度基本也没有变化的，为什么会没有吸收呢？？？请教下你啊...

看你的描述，有可能是背景太高，底物浓度低，遮蔽了底物
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6楼2014-03-31 12:47:46
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softwind-77

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
wenrongti: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2014-04-01 18:12:50
通常情况下底物与酶反应，需要底物与酶形成瞬间的结合，然后分开，这样一个过程，也就是我们说的酶反应动力学，如果酶与底物的结合域，使得酶正好把底物包裹住，类似于发卡结构，这样的话酶浓度过高就会掩盖了底物的吸光度，还有可能性就是加入的酶过多，导致底物很快被水解完全，所以检测不出来，而稀释之后底物有残留，希望能对楼主有所启示
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7楼2014-03-31 20:52:34
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wenrongti

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by l68266152 at 2014-03-31 12:47:46
看你的描述，有可能是背景太高，底物浓度低，遮蔽了底物...

嗯嗯，请教下你做酶实验是怎么做的呢？需要加辅酶吗？怎么来选辅酶比较好？
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8楼2014-04-01 18:11:52
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softwind-77

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dllchina: 金币+1, 多多交流 2014-04-01 19:55:42
wenrongti: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-04-01 20:39:39
引用回帖:
8楼: Originally posted by wenrongti at 2014-04-01 18:11:52
嗯嗯，请教下你做酶实验是怎么做的呢？需要加辅酶吗？怎么来选辅酶比较好？...

有些糖苷水解酶是不需要加辅酶的，而有的污染物降解关键酶是需要辅酶或者辅因子的，因为涉及到相关电子传递链，需要别的酶或者辅助完成，这就得看你你的酶本身的功能而选择的
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10楼2014-04-01 19:49:55
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