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wenrongti

新虫 (小有名气)

[求助] 酶反应时,酶的浓度过高会影响底物的紫外吸收吗???及时发金币的。已有2人参与

细胞破碎之后,离心除去菌体,取上清液,即粗酶液,用粗酶液做参比,在1ml粗酶液中加入适当的底物,再用紫外扫描,发现底物没有吸收峰,基本都是平的,接着我就对粗酶液稀释一定的倍数之后,再加入我的底物,这时就有峰了,我的问题是酶的浓度高时,底物的紫外吸收会受到影响吗???
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wenrongti

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by softwind-77 at 2014-03-31 20:52:34
通常情况下底物与酶反应,需要底物与酶形成瞬间的结合,然后分开,这样一个过程,也就是我们说的酶反应动力学,如果酶与底物的结合域,使得酶正好把底物包裹住,类似于发卡结构,这样的话酶浓度过高就会掩盖了底物的 ...

请教下朋友,你坐酶实验是如何做的?需要加辅酶吗?如何来选辅酶?
9楼2014-04-01 18:14:11
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wenrongti: 金币+3, 有帮助 2014-03-26 19:10:12
wenrongti: 金币+3, 有帮助 2014-03-27 17:47:58
会,但要具体分析你用的什么酶,什么底物,什么产物,什么缓冲液
相信自己
2楼2014-03-26 18:53:03
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wenrongti

新虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by l68266152 at 2014-03-26 18:53:03
会,但要具体分析你用的什么酶,什么底物,什么产物,什么缓冲液

但我的参比本身也是粗酶啊,消除了酶对紫外吸收的影响啊,底物还是没有吸收。缓冲液是磷酸盐溶液,酶就是用我的底物诱导的酶,没有细胞破碎之前底物是可以降解的。你能再具体解释下,酶怎么就会对底物的紫外吸收造成影响呢?为什么底物加到粗酶里面扫出来是平的??
3楼2014-03-26 19:10:03
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l68266152

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wenrongti at 2014-03-26 19:10:03
但我的参比本身也是粗酶啊,消除了酶对紫外吸收的影响啊,底物还是没有吸收。缓冲液是磷酸盐溶液,酶就是用我的底物诱导的酶,没有细胞破碎之前底物是可以降解的。你能再具体解释下,酶怎么就会对底物的紫外吸收造 ...

是做的紫外全波长扫描么?“平的”时候吸光值是多少?
相信自己
4楼2014-03-27 12:33:53
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wenrongti

新虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by l68266152 at 2014-03-27 12:33:53
是做的紫外全波长扫描么?“平的”时候吸光值是多少?...

是的,全波段,平的时候略微有点吸收,但很小,就没注意了,是没事原因呢?进了下液相,发现我的底物还在,浓度基本也没有变化的,为什么会没有吸收呢???请教下你啊
5楼2014-03-27 17:47:32
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l68266152

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wenrongti at 2014-03-27 17:47:32
是的,全波段,平的时候略微有点吸收,但很小,就没注意了,是没事原因呢?进了下液相,发现我的底物还在,浓度基本也没有变化的,为什么会没有吸收呢???请教下你啊...

看你的描述,有可能是背景太高,底物浓度低,遮蔽了底物
相信自己
6楼2014-03-31 12:47:46
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softwind-77

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
wenrongti: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2014-04-01 18:12:50
通常情况下底物与酶反应,需要底物与酶形成瞬间的结合,然后分开,这样一个过程,也就是我们说的酶反应动力学,如果酶与底物的结合域,使得酶正好把底物包裹住,类似于发卡结构,这样的话酶浓度过高就会掩盖了底物的吸光度,还有可能性就是加入的酶过多,导致底物很快被水解完全,所以检测不出来,而稀释之后底物有残留,希望能对楼主有所启示
7楼2014-03-31 20:52:34
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wenrongti

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by l68266152 at 2014-03-31 12:47:46
看你的描述,有可能是背景太高,底物浓度低,遮蔽了底物...

嗯嗯,请教下你做酶实验是怎么做的呢?需要加辅酶吗?怎么来选辅酶比较好?
8楼2014-04-01 18:11:52
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softwind-77

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dllchina: 金币+1, 多多交流 2014-04-01 19:55:42
wenrongti: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-04-01 20:39:39
引用回帖:
8楼: Originally posted by wenrongti at 2014-04-01 18:11:52
嗯嗯,请教下你做酶实验是怎么做的呢?需要加辅酶吗?怎么来选辅酶比较好?...

有些糖苷水解酶是不需要加辅酶的,而有的污染物降解关键酶是需要辅酶或者辅因子的,因为涉及到相关电子传递链,需要别的酶或者辅助完成,这就得看你你的酶本身的功能而选择的
10楼2014-04-01 19:49:55
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