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15879003030

铜虫 (小有名气)

[求助] 请问大家有什么办法可以克服引物产生的高级结构 已有1人参与

如题,最近PCR发现pcr产物末端 也就是引物的5‘端老有突变,我预计是引物5’端自身有发夹结构,我用Oligo看过,发夹结构的温度只有30度左右,但是实际上不知道为什么产物就是不对,产物PCR效果是很好的,只是末端有突变而已,所以想问问各位大神谁知道有什么办法可以克服引物的二级结构,需要加什么buffer之类的?    我自己的引物TM是69℃,我退火用的是66度, 68度也用过,能P但依然有突变。
请问大家有什么办法可以克服引物自身产生的高级结构?
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-26 18:04:04
NEB有以一种热稳定的SSB,估计能有点帮助,你可以试试看。
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-03-26 15:37:32
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