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熙玥

新虫 (初入文坛)

[求助] 启动子克隆 已有3人参与

各位大虾，我现在在克隆梅子这类植物中的一个品种的启动子，而现在已经测序得到了另外一个品种的基因组序列，我就以测序得到的序列为引物设计模版，希望得到我手上材料的启动子，但是试了很多次都没有得到，我想知道是不是这种方法不对，只能用TALL-PCR这种方法才行？谢谢！
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1楼 2014-03-24 20:02:56
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-25 10:40:27
熙玥: 金币+2 2014-04-09 13:14:06
Tail-PCR可以获得对应序列，你也可以通过你已知序列做inverse-PCR
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hehe
2楼2014-03-25 08:16:04
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ytetyio09

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-25 10:40:37
熙玥: 金币+5 2014-04-09 13:14:15
可以试试这篇论文的方法，虽然是个小的改进，但是确实有效：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256
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3楼2014-03-25 09:37:49
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cjzyfx

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-25 10:40:54
熙玥: 金币+2 2014-04-09 13:14:21
完全可以根据已有的序列克隆其他品种的启动子，你扩增不出来有可能是很多原因，不如引物不好，PCR体系不好等等，多设计引物试试，利用Tail-PCR也可以，但是这些方法随机性很大
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迷茫的蚊子
4楼2014-03-25 10:36:34
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