应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何检测目的片段转没转到质粒上？
172/2返回列表上一页12
查看: 3597  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

冰糖-葫芦娃

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by amberqiong at 2014-03-25 16:23:56
直接用菌液就行了，不过我一般都是用牙签挑菌的时候先在液体培养基中粘一下，再把牙签在PCR体系中粘一下，一点点菌就够做菌落PCR了

现在有些迷糊了，菌落PCR和菌液PCR是一回事吗？两者有什么区别？我从培养基上挑取菌落放到含氨苄液体培养基上摇菌过夜，在吸取这菌液做PCR叫菌液PCR是吗？
赞一下 回复此楼
11楼2014-03-25 21:38:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰糖-葫芦娃

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yuanyuanlg01 at 2014-03-24 19:37:50
肯定是提取质粒然后放PCR呀。一般是你的质粒上是有抗性的，这样就能筛选出质粒成功进去的。然后挑单菌落，提取质粒放PCR，然后和之前的样品一起跑胶，你的插入片段，原质粒。然后大小一样的话，就能去测序进行最终的 ...

我用的连接载体是promega的T载，应该是TA克隆吧？但是TA克隆需要在PCR产物末端加上A尾，那如何知道我的PCR产物末端有A？我用的是TaKara的普通Taq酶。
赞一下 回复此楼
12楼2014-03-25 21:47:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

geneyhh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
冰糖-葫芦娃(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-04-01 00:45:21
很简单直接菌液pcR！进一步确认需要测序！

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
13楼2014-03-25 22:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanyuanlg01

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 冰糖-葫芦娃 at 2014-03-25 21:47:59
我用的连接载体是promega的T载，应该是TA克隆吧？但是TA克隆需要在PCR产物末端加上A尾，那如何知道我的PCR产物末端有A？我用的是TaKara的普通Taq酶。...

哦，你用的是TA克隆，我们是酶切法的，不过你可以在PCR引物设计的时候加上呀。这个应该是没问题挺容易的把。希望有帮助。
赞一下 回复此楼
14楼2014-03-26 10:33:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

m情深守护

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冰糖-葫芦娃(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 20:06:50
先做菌落pcr，模板就是挑取的菌，10μ升稀释，取1μ升做模板。其他条件与基因克隆一致。最好使用通用引物。挑菌保存。若pcr有目的条带，则将，保存的菌液接种提质粒双酶切鉴定。希望对你有帮助。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
15楼2014-03-26 16:27:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邹忌

铁杆木虫 (小有名气)
直接挑菌落PCR
回复此楼
不是不能，只是不想
16楼2014-04-22 15:17:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郑凤席

新虫 (小有名气)
我一般都是先挑菌落做pcr，然后电泳检测看有没有链接上。个人意见，仅供参考，祝好运!
赞一下 回复此楼
17楼2015-07-10 15:46:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 冰糖-葫芦娃 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:23 by Xc2FxHsHkBNc
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:50 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 6/300 2026-11-07 15:44 by Xc2FxHsHkBNc
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭