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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何检测目的片段转没转到质粒上？
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冰糖-葫芦娃

铁虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by amberqiong at 2014-03-25 16:23:56
直接用菌液就行了，不过我一般都是用牙签挑菌的时候先在液体培养基中粘一下，再把牙签在PCR体系中粘一下，一点点菌就够做菌落PCR了

现在有些迷糊了，菌落PCR和菌液PCR是一回事吗？两者有什么区别？我从培养基上挑取菌落放到含氨苄液体培养基上摇菌过夜，在吸取这菌液做PCR叫菌液PCR是吗？
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11楼2014-03-25 21:38:25
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冰糖-葫芦娃

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yuanyuanlg01 at 2014-03-24 19:37:50
肯定是提取质粒然后放PCR呀。一般是你的质粒上是有抗性的，这样就能筛选出质粒成功进去的。然后挑单菌落，提取质粒放PCR，然后和之前的样品一起跑胶，你的插入片段，原质粒。然后大小一样的话，就能去测序进行最终的 ...

我用的连接载体是promega的T载，应该是TA克隆吧？但是TA克隆需要在PCR产物末端加上A尾，那如何知道我的PCR产物末端有A？我用的是TaKara的普通Taq酶。
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12楼2014-03-25 21:47:59
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geneyhh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
冰糖-葫芦娃(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-04-01 00:45:21
很简单直接菌液pcR！进一步确认需要测序！

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13楼2014-03-25 22:30:43
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yuanyuanlg01

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 冰糖-葫芦娃 at 2014-03-25 21:47:59
我用的连接载体是promega的T载，应该是TA克隆吧？但是TA克隆需要在PCR产物末端加上A尾，那如何知道我的PCR产物末端有A？我用的是TaKara的普通Taq酶。...

哦，你用的是TA克隆，我们是酶切法的，不过你可以在PCR引物设计的时候加上呀。这个应该是没问题挺容易的把。希望有帮助。
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14楼2014-03-26 10:33:49
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m情深守护

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冰糖-葫芦娃(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 20:06:50
先做菌落pcr，模板就是挑取的菌，10μ升稀释，取1μ升做模板。其他条件与基因克隆一致。最好使用通用引物。挑菌保存。若pcr有目的条带，则将，保存的菌液接种提质粒双酶切鉴定。希望对你有帮助。

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15楼2014-03-26 16:27:33
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邹忌

铁杆木虫 (小有名气)
直接挑菌落PCR
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不是不能，只是不想
16楼2014-04-22 15:17:30
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郑凤席

新虫 (小有名气)
我一般都是先挑菌落做pcr，然后电泳检测看有没有链接上。个人意见，仅供参考，祝好运!
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17楼2015-07-10 15:46:39
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