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冰糖-葫芦娃

铁虫 (初入文坛)

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专业: 有机化工

[求助] 如何检测目的片段转没转到质粒上？已有10人参与

将目的基因片段连接到载体上，再导入到大肠杆菌中，LB培养基上长出了白斑，下一步我想挑一些单菌落做一下PCR，想看看目的片段转没转到质粒上，是将单菌落挑到加有氨苄的LB液体培养基里培养过夜，然后用这个菌液直接PCR么？还是提取质粒做PCR？如果这样该如何操作呢？有些茫然啊~

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1楼 2014-03-23 21:11:02

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冰糖-葫芦娃

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by yuanyuanlg01 at 2014-03-24 19:37:50
肯定是提取质粒然后放PCR呀。一般是你的质粒上是有抗性的，这样就能筛选出质粒成功进去的。然后挑单菌落，提取质粒放PCR，然后和之前的样品一起跑胶，你的插入片段，原质粒。然后大小一样的话，就能去测序进行最终的 ...

我用的连接载体是promega的T载，应该是TA克隆吧？但是TA克隆需要在PCR产物末端加上A尾，那如何知道我的PCR产物末端有A？我用的是TaKara的普通Taq酶。