24小时热门版块排行榜    

查看: 3313  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

冰糖-葫芦娃

铁虫 (初入文坛)

[求助] 如何检测目的片段转没转到质粒上? 已有10人参与

将目的基因片段连接到载体上,再导入到大肠杆菌中,LB培养基上长出了白斑,下一步我想挑一些单菌落做一下PCR,想看看目的片段转没转到质粒上,是将单菌落挑到加有氨苄的LB液体培养基里培养过夜,然后用这个菌液直接PCR么?还是提取质粒做PCR?如果这样该如何操作呢?有些茫然啊~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

m情深守护

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
冰糖-葫芦娃(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 20:06:50
先做菌落pcr,模板就是挑取的菌,10μ升稀释,取1μ升做模板。其他条件与基因克隆一致。最好使用通用引物。挑菌保存。若pcr有目的条带,则将,保存的菌液接种提质粒双酶切鉴定。希望对你有帮助。

[ 发自小木虫客户端 ]
15楼2014-03-26 16:27:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-03-24 09:18:28
培养过夜后的菌液做模版直接PCR就行(可以取1微升做模版),引物、dNTP、buffer、程序什么的都跟普通PCR一样。
2楼2014-03-24 08:18:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-03-24 09:18:36
直接菌液PCR就行,把菌沸水煮10分钟裂解下。也可以提质粒做双酶切看看有没有接上去。
3楼2014-03-24 08:32:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-25 10:49:34
可以用2ML的管加650ul左右LB(含抗生素),小枪头挑单克隆摇菌。直接用菌液做PCR,不用煮沸。PCR预变性5min就可以了。     注意不要交叉污染和水污染了。
4楼2014-03-24 16:43:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +4 启萌科技 2026-08-12 12/600 2026-08-14 09:07 by switchoff
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 30/1500 2026-08-14 07:55 by 医学老男孩
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
请填处理意见