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xhj83

铁虫 (小有名气)

[求助] 液相条件的请教

各位大侠,我现在在做两个生物碱类的含量,我想在一个条件把两个东西一起检测出来,一个吸收峰在235nm,一个在267nm,报道的流动相不同,但是都是用的不同组成和PH的盐缓冲液,请教我该如何去思考我的缓冲溶液的成分,组成和PH,谢谢,提供思路。
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lionguy

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

“流动相不同,但是都是用的不同组成和pH的盐缓冲液”?
1、若是都是磷酸盐或者都是醋酸盐、或许都是酸性条件,可以考虑同时检测;但是需要在仪器上进行流动相条件的探索,具体做法是:配制出您可能需要的那个缓冲盐溶液(或者几个浓度、几个不同pH值),利用HPLC仪器上的不同液路通道,探索多种情况不同比列得流动相组合时,被测组分保留时间的具体情况。
2、利用二极管阵列检测器完全可以同时设定不同检测波长组分的检测,但需要注意:几个浓度、几个不同pH值的、不同水相有机相比例的流动相可能会引起原来检测波长的变化,可能原来的最大吸收峰在新的流动相条件下已经不是最大吸收峰了,需要进一步确证!这一点可以利用二极管阵列检测器的3D检测功能,设定一个检测波段,例如:检测210纳米——400纳米,根据所检测出的图谱,重新确定最佳流动相条件和最大吸收峰位置。
3、用单组份标准溶液确定2个组分在新的色谱条件下的出峰顺序,确定其具体的保留时间,因为只有2个组分,通常可以考虑将其保留时间都在5分钟以后,20分钟以前,且保证分离度大于1.5;即可。
2楼2014-03-23 10:21:56
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zheng0123

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

现在的检测器不一般都是双波长吗?用水就行了,一般的缓冲盐无非就是出峰好看,

[ 发自小木虫客户端 ]
好好学习,天天睡觉
3楼2014-03-29 06:14:39
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z植琼连

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

对滴,跟liongguy的一样,这个方法可取。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
宠辱不惊
4楼2014-03-29 07:10:50
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