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液相条件的请教
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| 各位大侠，我现在在做两个生物碱类的含量，我想在一个条件把两个东西一起检测出来，一个吸收峰在235nm，一个在267nm,报道的流动相不同，但是都是用的不同组成和PH的盐缓冲液，请教我该如何去思考我的缓冲溶液的成分，组成和PH,谢谢，提供思路。 |
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lionguy
木虫 (著名写手)
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- 专业: 色谱分析
【答案】应助回帖
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“流动相不同，但是都是用的不同组成和pH的盐缓冲液”？ 1、若是都是磷酸盐或者都是醋酸盐、或许都是酸性条件，可以考虑同时检测；但是需要在仪器上进行流动相条件的探索，具体做法是：配制出您可能需要的那个缓冲盐溶液（或者几个浓度、几个不同pH值），利用HPLC仪器上的不同液路通道，探索多种情况不同比列得流动相组合时，被测组分保留时间的具体情况。 2、利用二极管阵列检测器完全可以同时设定不同检测波长组分的检测，但需要注意：几个浓度、几个不同pH值的、不同水相有机相比例的流动相可能会引起原来检测波长的变化，可能原来的最大吸收峰在新的流动相条件下已经不是最大吸收峰了，需要进一步确证！这一点可以利用二极管阵列检测器的3D检测功能，设定一个检测波段，例如：检测210纳米——400纳米，根据所检测出的图谱，重新确定最佳流动相条件和最大吸收峰位置。 3、用单组份标准溶液确定2个组分在新的色谱条件下的出峰顺序，确定其具体的保留时间，因为只有2个组分，通常可以考虑将其保留时间都在5分钟以后，20分钟以前，且保证分离度大于1.5；即可。 |
2楼2014-03-23 10:21:56
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