| 查看: 2905 | 回复: 10 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
pet32a双酶切之后，电泳条带找不到 已有3人参与
|
|||
|
小弟本科生一枚，最近在构建一种菌，可是经过了两个月的尝试，还是没有成功，愁死了，这个是学校的一个大学生训练项目，搞了这么久还没构建出菌种，我在九月之前还要做出目的蛋白的表达，对表达蛋白的性质做出研究，才能结题，现在是愁死了，求告各位大侠给予意见。 首先，我用的是X-hol和BamHI这两个酶，目的基因在2700左右，目的基因在经过PCR之后，做37度双酶切6h能跑出目的条带。这个是确定的。但是在双酶切32a质粒之后，确实无论如何也跑不出条带。后来又做了单酶切切pet-32a质粒，但是3h之后，依旧是没有任何条带出现。（声明：32a未经酶切的质粒是跑得出来的。）今日又做了分小时单酶切，做法是每半小时去一次37度酶切样品，迅速放入65度烘箱中使其中的酶失活，共切了两个小时，却还是没有跑出任何条带，这不应该啊，刚加入酶就取样的也没跑出来，这太不合理了吧！（取样：2微升跑胶。）今天的除了没有酶切过的质粒跑出来了非常明显的条带，其余的都没跑出来，是跑胶打样太少了么？ 双酶切体系：50微升 10Xbuffer tango 10微升 BamHi 2微升 X-hol 2微升 pet-32a质粒 36微升（有时质粒浓度高的话也会用25微升质粒加11微升ddH2O） 37度水浴6h 单酶切体系：20微升 buffer tango 4微升 BamHI 0.5微升 32a质粒 10微升 ddH2O 5.5微升 单酶切体系：20微升 buffer tango 4微升 X-hol 0.5微升 32a质粒 10微升 ddH2O 5.5微升 另外，跑胶电压是100V 时间是40分钟 这个应该不会有什么问题吧？ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有275人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
11楼2014-10-03 19:30:58
youlinglyw
荣誉版主 (著名写手)
一匡天下
-
专家经验: +37 - MolEPI: 1
- 应助: 136 (高中生)
- 贵宾: 0.077
- 金币: 8076.9
- 散金: 8858
- 红花: 208
- 沙发: 2
- 帖子: 1511
- 在线: 263.8小时
- 虫号: 787036
- 注册: 2009-06-04
- 性别: GG
- 专业: 认知科学
- 管辖: 生物科学
2楼2014-03-06 22:46:22
3楼2014-03-06 22:53:01
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7753.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
4楼2014-03-07 08:14:46
投票:
10